论文摘要
目的本实验旨在研究（1）在实验性脂肪性肝病中肝细胞凋亡和氧应激的作用以及相互关系，并探讨其可能的机制。（2）研究高脂和酒精两种不同的病因对肝脏的影响以及两者是否对肝脏有协同损伤作用，从而进一步探讨脂肪性肝病的发病机制。材料与方法雄性Wistar大鼠46只，按体重分层随机分为4组：对照组（N）11只，酒精组（A）12只，高脂组（F）11只，高脂加酒精组（FA）12只。酒精组应用酒精灌胃，高脂组给予高脂饮食，酒精加高脂组为两者的叠加，对照组应用与酒精等量的生理盐水灌胃。每周称取大鼠体重，于16周末处死，称其体重，肝湿重；取血测血清中ALT、AST、CHO、TG、FFA、；取肝组织测定肝组织中SOD、MDA、GSH：取肝组织采用RT-PCR法测定肝组织中caspase-3的基因表达；取肝组织福尔马林固定免疫组化法测定caspase-3的蛋白表达；TUNEL法测定肝细胞凋亡指数；HE染色，光镜下观测肝组织学变化；电镜下观察肝细胞凋亡情况。结果1．大鼠体重及肝脏指数变化：F组大鼠体重明显高于其他各组（P＜0.05），其次是A、N、FA组，但后三组比较无统计学意义（P＞0.05）。肝指数比较，各实验组均比N组不同程度的升高（P＜0.05），以FA组最高，其次是F组、A组，而F组和A组间差异无显著性（P＞0.05）。2．肝脏组织学改变：光镜下H-E染色显示，N组大鼠肝小叶完整，肝细胞呈多边形，围绕中央静脉呈放射状，肝窦清晰可见，肝索排列整齐，肝小叶汇管区基本结构清晰可见。实验组大鼠肝脏轻至中重度脂肪变，伴肝细胞气球样变，点灶状坏死，汇管区轻至中度炎细胞浸润，其中以FA组和F组脂肪变最严重，FA组炎症坏死最重，和其他各组相比有统计学意义（P＜0.05），可以看到多处灶状坏死和碎屑样坏死，汇管区轻度纤维化。3．血清生化指标的变化：实验组ALT、AST均比N组高，且差别有统计学意义（P＜0.05），以FA组最高，依次为F组、A组，但F组和A组比较差异无统计学意义（P＞0.05），其余各组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。4．各组血脂及血清游离脂肪酸的结果：实验组大鼠体内血脂均有不同程度的升高，以FA组升高最显著，其次是F组、A组。其中CHO在各组中两两比较均有统计学差异（P＜0.05）；TG在FA组与F组比较无统计学意义（P＞0.05），其余各组两两比较均有统计学意义（P＜0.05）；FFA在A组与N组间，F组与FA组间比较差异无显著性外（P＞0.05），在其余各组两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。5．各组肝组织匀浆氧化应激指标测定结果：GSH、SOD在实验组均有不同程度的降低，以FA组最为明显，其次是F组和A组，除F组和A组间差别无统计学意义外（P＞0.05），其余各组比较差别均有显著性（P＜0.05）；MDA中实验组均有不同程度的升高，以FA组最为明显，其次是A组、F组，除F组与A组间无统计学意义外（P＞0.05），其余各组差别均有统计学意义（P＜0.05）。6．各组肝细胞凋亡指数的测定结果各实验组大鼠肝细胞凋亡指数明显增加（酒精组、高脂组、酒精加高脂组分别2.16±0.43，2.33±0.60，3.93±0.80）显著高于正常对照组（1.07±0.27，P＜0.05），实验组凋亡细胞多见于中央静脉周围的小叶3区，在其它部位偶可见到，在炎症、坏死明显的区域凋亡较明显，以FA组凋亡最明显，然后是F组和A组除F组和A组间差别无统计学意义外（P＞0.05），其余各组比较差别均有显著性（P＜0.05），凋亡指数和炎症程度，MDA含量呈正相关（P＜0.05），与GSH、SOD呈负相关（P＜0.05）。7．各组caspase-3的蛋白表达以及基因表达结果在实验组无论是基因表达还是蛋白表达均较对照组升高（P＜0.05），其中以FA组增加最明显，F组和A组之间无统计学差异（P＞0.05），除F组和A组间差别无统计学意义外（P＞0.05），其余各组比较差别均有显著性（P＜0.05）。caspase-3及caspase-3 mRNA表达的析因分析显示，加用与不加用酒精（A）对肝脏caspase-3及其基因的表达差异有显著性意义（P=0.00）；加用与不加用高脂饮食（F）对caspase-3及其基因表达有显著性差异（P=0.00）；F与A交互效应显著（P＜0.05）。8．肝组织超微病理变化：实验组肝细胞核膜皱缩，细胞浆疏松，线粒体肿胀，线粒体嵴脱失，胞浆内可见多少不等的脂滴，可见中性粒细胞、单核细胞等炎性细胞浸润。9．Caspase-3，MDA、脂肪变程度、炎症程度相关性分析各组caspase-3与肝细胞凋亡指数呈正相关（r=0.829，P＜0.01），caspase-3表达与MDA呈显著正相关（r=0.974，P＜0.01），而与GSH，SOD呈明显负相关（r=-0.768，P＜0.01；r=-0.948，P＜0.01），与脂肪变程度和炎症分级呈正相关（r=0.73，0.85，P＜0.05）。结论1．酒精和高脂饮食两种病因叠加加重肝脏损害；2．酒精和高脂饮食可能通过增加氧应激、脂质过氧化引起肝脏炎症，凋亡，坏死和纤维化，炎症反应和氧化应激越重，细胞凋亡发生率越高。
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