柴胡皂苷a的药代动力学及药物相互作用研究

论文摘要

一、柴胡皂苷a在Caco-2细胞模型中吸收机制的研究建立测定细胞悬液以及Hank’s液中柴胡皂苷a的液相色谱—质谱联用的方法,运用细胞培养板和Millicell装置来研究柴胡皂苷a在Caco-2细胞中的吸收机制。研究发现,Caco-2细胞对柴胡皂苷a的摄取量与各自的摄取时间及给药浓度有关,60 min之后呈饱和趋势；柴胡皂苷a的摄取量随给药浓度的增大而增大,呈现良好的线性关系,其摄取量与温度无关,表明柴胡皂苷a在Caco-2细胞中的吸收方式为被动扩散。柴胡皂苷a的表观通透系数Papp （AP to BL）为3.45×10-8 cm·sec-1,表明柴胡皂苷a膜通透性差,可能导致低吸收；同时柴胡皂苷a的Papp （AP to BL）随给药浓度的变化而变化,继摄取实验再次证明柴胡皂苷a的吸收为被动扩散。进一步实验表明,EDTA能显著提高柴胡皂苷a的Papp,证明柴胡皂苷a的吸收机制为被动扩散中的胞旁扩散。因此,柴胡皂苷a吸收差可能是由于其极低的膜通透性所致,而其胞旁扩散的机制极可能是引起其膜通透性极低的原因之一。二、柴胡皂苷a在大鼠体内的药动学研究首先建立了测定柴胡皂苷a血浆药物浓度的液相色谱-电喷雾离子化-质谱联用（LC-ESI-MS）的分析方法,探讨其在大鼠体内的药动学研究中的应用。将SD大鼠12只,随机分为2组,分别单剂量静注（5mg·kg-1）和灌胃（50mg·kg-1）柴胡皂苷a,用LC-MS法测定给药后的大鼠血药浓度,并利用DAS软件拟合并计算其药动学参数。试验结果表明,柴胡皂苷a的血药浓度在0.025～5μg·mL-1范围内线性关系良好,最低检测限为25 ng·mL-1,以质控样品计算,在各浓度水平下,此法的回收率均大于80%,日间和日内精密度小于10%,符合生物样品分析要求。大鼠单剂量灌胃（50 mg·kg-1）柴胡皂苷a后,其血药浓度都低于检测下限。随后加大给药剂量（200 mg·kg-1）发现血药浓度仍然较低,在1.5小时的血药浓度约为50ng·mL-1,其余都低于定量下限。大鼠单剂量静注柴胡皂苷a 5mg·kg-1后,血药浓度-时间曲线符合二室模型。主要药动学参数Tmax,Cmax, AUC（0-t）, T1/2β, CL, Vd分别为：5min,1907μg·L-1,64370μg·h-1·mL-1,100.6min, 0.0867 L·min-1·kg-1,21.89 L·kg-1。该方法操作简便、快速、灵敏、专属性强,可用于柴胡皂苷a的体内大批量样品定量分析及药动学研究。三、柴胡口服液与小柴胡颗粒对大鼠灌服环孢素药动学影响将16只SD大鼠按体重进行随机区组设计,分为小柴胡组和柴胡口服液组。每日早晚每只大鼠灌胃给予CsA（10 mg·kg-1）,试验d6早晨给药后分别于0、1、2、4、6、8、12、24、32h从尾静脉处采血0.6 mL。然后各组大鼠从试验的d 6到d10进行不同的预处理,即第一组每日早晚灌胃给予CsA（10mg·kg-1）和小柴胡颗粒（2 g·kg-1）,第二组每日早晚灌胃给予CsA（10mg·kg-1）和柴胡口服液（2g·kg-1）,连续给药5天。d12早上服药后按d 6的时间点采样。用HPLC法测定全血中CsA的浓度,计算其主要药动学参数并进行统计学分析。合并用药前两组间的CsA药动学参数无显著性差异；合并用药后,小柴胡组和柴胡口服液组CsA的Cmax、AUC0-32和AUC0-∞显著增大（P<0.05）, CL、V/F、t1/2变化不明显（P>0.05）。试验结果表明,小柴胡和柴胡口服液均能显著提高CsA的灌服生物利用度,但对CsA的体内消除过程几乎没有影响。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 第一章 柴胡皂苷的研究进展
• 1.柴胡皂苷类化学成分研究
• 2.柴胡皂苷药理作用研究
• 3.展望
• 参考文献
• 第二章 CACO-2细胞模型及其在中药吸收研究中的应用
• 1.Caco-2细胞体外模型
• 2.Caco-2细胞模型在中药吸收转运研究中的应用
• 3.Caco-2单层细胞模型研究中药吸收转运机制的评价
• 4.小结
• 参考文献
• 第三章 影响环孢素血药浓度的因素及其药物相互作用
• 1.影响环孢素体内血药浓度的因素
• 2.药物相互作用的影响
• 参考文献
• 第二部分 实验部分
• 第一章 柴胡皂苷A在CACO-2细胞模型中吸收机制的研究
• 1.前言
• 2.Caco-2细胞的培养及模型的建立与评估
• 3.MTT实验
• 4.柴胡皂苷a在Caco-2细胞模型上的摄取特性研究
• 5.柴胡皂苷a在Caco-2细胞模型上的转运实验
• 参考文献
• 第二章 柴胡皂苷A在大鼠体内的药动学研究
• 1.前言
• 2.实验材料与方法
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 实验动物及给药方法
• 2.4 样品处理方法学研究
• 2.5 色谱条件
• 2.6 质谱检测条件
• 2.7 标准曲线及质控样品的配制
• 2.8 数据处理
• 3.结果
• 3.1 色谱行为
• 3.2 标准曲线及最低定量限（LLOQ）
• 3.3 日内与日间精密度
• 3.4 提取回收率及样品稳定性考察
• 3.5 大鼠体内药代动力学
• 4.讨论
• 5.小结
• 参考文献
• 第三章 柴胡口服液与小柴胡颗粒对大鼠灌服环孢素药动学影响
• 1.前言
• 2.药品、试剂、仪器与实验动物
• 2.1 药品与试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 实验动物
• 3.大鼠血浆中环孢素分析方法的建立
• 3.1 溶液配制
• 3.2 色谱条件
• 3.3 样品预处理
• 3.4 分析方法确证
• 4.实验设计与给药方案
• 5.数据处理与统计分析
• 6.实验结果
• 7.讨论
• 参考文献
• 第三部分 结论
• 附录
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢