HO-1基因与卡波氏肉瘤相关性的研究

HO-1基因与卡波氏肉瘤相关性的研究

论文摘要

目的:本研究旨在探讨血红素加氧酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)基因抗凋亡通路在卡波氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma, KS)发生发展中的作用以及可能机制。方法:收集21例新疆KS患者肿瘤组织、瘤旁正常皮肤组织以及14例非KS患者的正常皮肤组织样本作为对照,分别采用Real-time PCR和免疫组化技术,从mRNA和蛋白水平检测样本中HO-1表达情况。从组织水平检测HO-1的抗凋亡通路:免疫组化Envision方法检测KS患者肿瘤组织及正常皮肤组织中p38和TNFa表达;原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)检测KS患者肿瘤组织及正常皮肤组织中凋亡指数(apoptoticindex ,AI)。从细胞水平检测HO-1的抗凋亡通路:培养BCBL1细胞,TNFa诱导细胞凋亡,以及HO-1激活剂Hemin、HO-1抑制剂Znpp和p38抑制剂SB203580分别刺激细胞,诱导和抑制细胞内HO-1表达,抑制p38表达。Western Blot方法检测HO-1、p38和TNFa蛋白水平表达,同时流式细胞仪检测凋亡率。结果:(1)用双标准曲线相对定量法分析实时定量PCR结果,KS肿瘤组织中HO-1mRNA相对表达量为14.14±11.64,瘤旁正常皮肤组织为5.5±8.05,差异有统计学意义(t=4.074,p<0.01)。对照的正常皮肤组织为1.82±2.62,肿瘤组与对照组相比差异有统计学意义(t=2.731, p<0.05)。(2)免疫组化结果:HO-1蛋白在KS组织中的阳性表达率显著高于在正常皮肤组织中的表达(x2=15.56,P<0.01),其阳性反应程度在两组比较差异有统计学意义(t=11.305,P<0.01)。(3)p38蛋白在KS组织中的阳性表达率显著高于在正常皮肤组织中的表达,其阳性反应程度在两组比较差异有统计学意义(t=9.044,P<0.01 )。而TNFa蛋白表达在KS实验组中7例阳性,7例表达阴性。表达阳性的多数定位在梭型细胞或浆细胞,但实验组与对照组间无显著性差异(t=1.427,P>0.05)。KS组织中AI明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(t=3.183,P<0.01)。(4)流式细胞仪检测凋亡率和Western Blot结果显示:HO-1、p38在BCBL1细胞中高表达,TNFa在BCBL1细胞中低表达,HO-1可抑制TNFa引起的凋亡。Hemin诱导HO-1高表达后细胞凋亡率为4.37%,Znpp抑制HO-1表达后细胞凋亡率为31.81%, SB203580抑制p38表达后细胞凋亡率为19.71%。表明Hemin处理后HO-1表达上调,显著抗细胞凋亡,而Znpp抑制HO-1表达后,凋亡率大量增加,SB203580抑制p38表达后,凋亡率也显著增加。细胞凋亡率与HO-1表达量呈负相关。结论:(1)HO-1基因在KS组织中mRNA和蛋白水平表达均增高;(2)HO-1基因在HHV-8感染的BCBL1细胞中同样高表达;(3)HO-1基因与KS的发生发展相关。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 英文缩略语表
  • 前言
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 3 数据处理
  • 结果
  • 1. HO-1 在 KS 组织中 mRNA 水平表达的检测结果
  • 2 HO-1 抗凋亡通路在组织水平的检测结果
  • 3 HO-1 抗凋亡通路在细胞水平的检测结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 文献综述
  • 致谢
  • 作者简介
  • 导师评阅表
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