论文摘要
目的:通过药效学实验跟踪有效成分,筛选粗叶悬钩子抗肝损伤类的活性成分,对有效成分进行初步鉴定,并对有效成分作用机制作初步的探讨。方法:(1)中药常规提取方法制备粗叶悬钩子分类提取物总生物碱,并进行检测。(2)根据总生物碱内成分极性的不同,分别用乙酸乙酯、正丁醇、氯仿等溶剂萃取其不同极性部位。(3)制备小鼠急性肝损伤模型,并用不同极性部位进行干预,观察效果,选取有效极性部位。(4)通过传统柱层析的方法,进一步分离有效极性部位,并合并极性相同或相近的馏分。(5)通过制备色谱法和高效液相色谱法,进一步分离成分。(6)培养大鼠肝细胞,并制备肝细胞损伤模型,通过药物干预模型,观察相关指标的变化,最终选取粗叶悬钩子抗肝损伤的有效成分。结果:(1)粗叶悬钩子抗肝损伤有效成分-129③的不同药物浓度均可不同程度地降低肝细胞培养上清液中ALT、AST的含量;(2)129③的不同药物浓度能不同程度地升高肝细胞培养上清液中SOD的活性,同时降低MDA的含量;(3)129③的不同药物浓度能不同程度地促进肝细胞的增殖:(4)129③能不同程度地调节细胞生长周期,促使细胞向S期转化;(5)129③能显著下调CCl4损伤的大鼠肝细胞中Caspase-3mRNA的表达,并且上调PCNAmRNA的表达。结论:(1)129③是粗叶悬钩子中抗肝损伤的有效活性成分;(2)129③能保护肝细胞膜,减轻肝细胞受损的程度;(3)129③能抑制自由基的生成和脂质过氧化产物的生成,提高肝细胞的抗氧化能力;(4)129③促进肝细胞地增殖,抑制细胞凋亡;(5)129③能够调节细胞生长周期。
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