吕跃杰蒋家龙姜蕾王坤
（六安市中医院药剂科安徽六安237000）
【摘要】目的：研究养阴清咽颗粒的含量测定限度确定方法。方法：采用高效液相色谱法对制剂中绿原酸进行含量测定并确定含量限度。结果：绿原酸进样量范围在0.236μg～2.360μg之间峰面积与进样量线性关系良好。平均加样回收率为97.786%，RSD%=1.17%(n=6)。并通过六批样品确定制剂绿原酸的含量限度为1.0mg/g。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，可为该制剂质量标准的制定提供参考。
【关键词】养阴清咽颗粒；绿原酸；HPLC
【中图分类号】R944.2+7【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）10-0384-02
ThecontentlimitationdeterminedforYangyinqingyanGranulesZhengMuyao,JiangLei.
1InstituteforDrugcontrolofLuAn;2DeptofPharmacy;TheTraditionalHospitalofLuan;AnhuiLuan237000,China
【Abstract】ObjectiveToestablishthecontentlimitationforChlorogenicacidinYangyinqingyanGranules.MethodsThecontentofChlorogenicacidwasdeterminatedbyHPLC,andtodecidethecontentlimitationofYangyinqingyanGranules.ResultsTheexperimentshowedgoodlinearrelationshipattherangesof0.236μg-2.360μgfornaturallogarithmofpeakareaandconcentration.TheaveragerecoveryrareofChlorogenicacidwas97.79%,RSDwas1.17%(n=6).ThecontentlimitationofChlorogenicacidwasdeterminedat1.0mg/ginYangyinqingyanGranulesbydeterminatingsixbatchsamples.ConclusionTheestablishedmethodsarenotonlypracticalbutcapableofeffectivelycontrollingthequalityofYangyinqingyanGranules,togivereferenceforformulatingthequalitystandardforYangyinqingyanGranules.
【Keywords】YangyinqingyanGranules;Chlorogenicacid;HPLC
本实验对君药金银花的主要有效成分绿原酸含量限度进行了确定，为养阴清咽颗粒质量标准的建立提供依据。
1.仪器与试药
仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪（安捷伦G1316A紫外检测器、安捷伦G1310A泵）。
试剂：乙腈（色谱纯，TEDIA），甲醇、磷酸（分析纯），纯化水（自制）。
2.方法与结果[1]
2.1色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AgilentTC-C18，4.6×250mm，5um）；乙腈∶0.1%磷酸（13∶87）为流动相；检测波长为327nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10?l。
2.2溶液的制备
对照品溶液的制备精密称定绿原酸对照品11.80mg，置25ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度即可，作为储备液，备用。
供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约2g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50%甲醇40ml，称定重量，超声处理（功率200W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
缺金银花阴性样品的制备取缺金银花的阴性样品适量，研细，取约2g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50%甲醇40ml，称定重量，超声处理（功率200W，频率40kHz）30分钟，放冷称重，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.3方法学的考察
2.3.1缺味金银花阴性对照试验取供试品溶液、金银花对照品溶液和缺味金银花阴性样品溶液，依法操作，进行液相色谱分析，结果表明，绿原酸含量测定无干扰，专属性强。
2.3.2线性关系的考察精密移取绿原酸对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml至10ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，进样10?l，记录峰面积值。以绿原酸进样量为（μg）横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=2968.7X–22.077R2=0.9999。表明绿原酸苷进样量在0.236μg-2.360μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.3.3稳定性试验分别在0、2、4、6、8、12h精密吸取供试品溶液10?l注入高效液相色谱仪，记录峰面积，供试品溶液的峰面积RSD=0.38%(n=6)。结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。
2.3.4加样回收率试验取已知含量的供试品6份，每份约1g，精密称定，分别加绿原酸对照品约1.5mg，按供试品制备方法进行制备。分别进行测定，记录峰面积值，计算回收率（测得量－样品含量)/加入对照品量×%=回收率%），所得回收率平均值为97.786%，RSD%=1.17%。加样回收率试验结果见表1。
表1加样回收率试验结果
结果：经过对3批小试样品、3批中试样品进行含量测定，结果表明，养阴清咽颗粒中绿原酸的含量为1.3333～1.4472mg/g。根据中国药典（2010年版一部第205页“金银花”项下规定。）规定：金银花药材中绿原酸的含量不得少于1.5%，制成制剂后相当于每克不得少于5.0mg，养阴清咽颗粒原药材金银花中绿原酸的含量为21.50mg/g，通过计算得出养阴清咽颗粒中绿原酸的转移率为18.6%，即制成制剂后绿原酸的含量每克不少于0.93mg。考虑到金银花药材的来源及加工方法，制成本品每克含金银花以绿原酸计，不得少于1.0mg。六批样品所测得含量，每克含绿原酸均高于1.0mg。
2.4讨论
金银花为方中君药,故选择金银花中主要有效成分绿原酸为含量控制指标,由于绿原酸溶液性质不稳定,处理的样品溶液应在棕色容量瓶中保存,并在12小时内完成检测。在对绿原酸含量测定摸索时比较了不同类型色谱柱和流动相，最终选择了该实验中的方法，该方法稳定，重复性好。