BMPR-IB基因和PGR基因作为小尾寒羊多胎候选基因的研究

论文题目: BMPR-IB基因和PGR基因作为小尾寒羊多胎候选基因的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 动物遗传育种

作者: 张利平

导师: 赵有璋,连正兴

关键词: 小尾寒羊,蒙古羊,无角陶赛特羊,基因,基因,基因,多胎候选基因,多态性

文献来源: 甘肃农业大学

发表年度: 2005

论文摘要: 小尾寒羊是世界上繁殖力很高、一胎产羔数在个体间变异较大的绵羊品种,四季发情,一年两胎或两年三胎,每胎2-5羔,胎均产羔率为260%。寻找小尾寒羊多胎主基因及其分子遗传标记,对研究和利用小尾寒羊多胎性具有重要的理论价值和实际意义。试验采用高繁殖率四季繁殖的小尾寒羊(多胎品种)、中等繁殖率四季繁殖的无角陶赛特羊(非多胎品种)、低繁殖率季节繁殖的蒙古羊(非多胎品种)三个品种的繁殖母羊作为实验材料,用BMPR-IB基因(Bone Morphogenetic Protein Receptor-IB,BMPR-IB。即:骨形态发生蛋白受体IB基因)和PGR基因(Progesterone Receptor,PGR ,即:孕酮受体基因)作为多胎候选基因对小尾寒羊、蒙古羊、无角陶赛特羊进行分子水平探索研究。1 BMPR-IB基因多态性与小尾寒羊繁殖性能关系的研究试验采用已知繁殖性能的33只小尾寒羊母羊(山东梁山和泰安)、19只无角陶赛特羊母羊(甘肃永昌肉用种羊场)、14只蒙古羊母羊(甘肃武威)的血样,提取DNA。利用Australian Sheep Gene Mapping Web Site : AF298885引物(检测FecB基因引物),进行Forced - PCR扩增BMPR-IB基因限制性片段长度,对其PCR产物用AvaⅡ酶进行酶切判定基因型(目前研究已证明Booroola羊高繁殖特性主效基因FecB基因是BMPR-IB基因编码区746碱基突变A→G的结果。利用AF298885引物,Forced - PCR扩增BMPR-IB基因限制性片段长度,FecB基因存在时,BMPR-IB基因编码区746碱基A突变为G,其PCR产物产生AvaⅡ酶切位点。FecB基因简称B基因)。研究结果表明:(1)小尾寒羊BMPR-IB基因由BB、B+、++三种基因型组成,其基因型频率分别为0.3030、0.6061、0.0909,突变杂合B+和突变纯合BB为优势基因型、野生型++很低;无角陶赛特羊基因型频率分别为0、0.0526、0.9474;蒙古羊分别为0、0.0714、0.9286;无角陶赛特羊和蒙古羊基因型组成相似,只由++和B+两种基因型组成,而且B+频率也很低。均不存在BB基因型,其++野生型为优势基因型。小尾寒羊与无角陶赛特、蒙古羊在基因型组成上差异均极显著(P< 0.01),而无角陶赛特与蒙古羊之间差异不显著(P>0.05)。这与三个品种的多胎表型一致。(2)小尾寒羊的B和+基因频率分别为0.6061和0.3939,以突变基因B(FecB)为主,

论文目录:

论文中部分缩写中英文对照表

摘要

SUMMARY

第一篇文献综述

第一章绵羊多胎基因研究进展

1 研究绵羊多胎性状的意义

2 目前研究和改良绵羊多胎性的方法和手段

3 绵羊多胎主基因国内外的研究现状

3.1 BOOROOLA 羊多胎基因FECB 的研究进展

3.1.1 绵羊FECB 基因的发现

3.1.2 FECB 基因的定位

3.1.3 FECB 候选基因的研究

3.1.4 FECB 基因的遗传方式、效应及作用机理

3.1.5 FECB 基因的应用

3.2 FECX~1 基因和FECX~H 基因的研究进展

3.2.1 FECX~1 基因的发现

3.2.2 FECX~1 基因的定位及其作用

3.2.3 区域的标记研究进展

3.2.4 FECX~I 基因突变前体的研究进展

3.2.5 FMP15 基因的作用机制

3.3 FECX~(2W) 基因的研究进展

第二章孕酮受体（PGR）基因研究的进展

1 PGR 的分布

2 PGR 的结构和亚型

3 PGR 的生物学作用

4 PGR 作用的机理

5 PGR 基因的分子结构

6 绵羊PGR 基因的研究进展

第二篇试验研究

第一章 BMPR-IB 基因多态性与小尾寒羊繁殖性能关系的研究

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物及血样

1.1.2 实验仪器和试剂

1.1.2.1 主要仪器设备

1.1.2.2 药品和酶

1.1.3 溶液配制

1.2 实验方法

1.2.1 基因组DNA 的提取

1.2.2 引物

1.2.3 PCR 扩增反应

1.2.3.1 引物处理

1.2.3.2 PCR 最佳反应体系的建立

1.2.3.3 PCR 反应条件的建立

1.2.4 PCR 产物 AVAⅡ酶切

1.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测方法

1.2.6 统计分析方法

2 实验结果与分析

2.1 血液DNA 提取结果与分析

2.2 BMPR-IB 基因的检测

2.2.1 FORCED-PCR 扩增 BMPR-IB 基因限制性片段结果

2.2.2 FORCED-PCR 产物AVAⅡ酶切判定基因型

2.3 不同品种基因型频率和基因频率分析

2.4 小尾寒羊AVAⅡ酶切多态对繁殖性能的影响

3 讨论

3.1 DNA 的抽提

3.2 FORCED-PCR 扩增 BMPR-IB 基因产物AVAⅡ酶切判定FECB 基因

3.3 不同品种基因型频率和基因频率

3.4 小尾寒羊AVAⅡ酶切多态对繁殖性能的影响

4 结论

第二章 PGR 基因作为小尾寒羊多胎候选基因的研究

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物及血样

1.1.2 菌株与克隆载体

1.1.3 DNA 分析软件

1.1.4 实验仪器和试剂

1.1.4.1 主要仪器设备

1.1.4.2 试剂和酶

1.1.5 溶液配制

1.2 实验方法

1.2.1 绵羊血液DNA 的提取

1.2.2 PCR 引物设计

1.2.3 PCR 扩增反应

1.2.3.1 引物处理

1.2.3.2 PCR 最佳反应体系的建立

1.2.3.3 最佳PCR 反应条件的建立

1.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测PCR 反应产物

1.2.5 感受态细胞的制备

1.2.6 PCR 产物的克隆

1.2.6.1 DNA 片段回收

1.2.6.2 克隆载体的构建

1.2.6.3 PCR 产物的T 载体连接(PMD18-T VECTOR SYSTEMS )

1.2.6.4 转化过程

1.2.6.5 筛选重组子

1.2.7 重组质粒的阳性鉴定

1.2.7.1 菌落PCR 鉴定

1.2.7.2 双酶切鉴定

1.2.7.2.1 质粒的提取

1.2.7.2.2 限制性内切酶消化

1.2.8 DNA 测序分析

1.2.9 PGR-EXON 4 PCR-SSCP

1.2.9.1 PGR-EXON 4 限制性片段 PCR 扩增

1.2.9.2 14%非变性聚丙烯酰胺凝胶制作及电泳(SSCP)检测

1.3 试验结果统计分析

2 结果与分析

2.1 PGR-EXON 4 的亚克隆

2.1.1 PGR-EXON 4 限制性片段PCR 扩增结果与分析

2.1.2 PGR-EXON 4 PCR 产物回收

2.1.3 PGR-EXON 4 限制性片段亚克隆

2.1.4 PGR-EXON 4 限制性片段克隆测序及分析

2.2 PCR-SSCP 多态性检测结果与分析

2.3 三个品种PGR-EXON 4 限制性片段测序结果分析

3 讨论

3.1 PGR-EXON 4 PCR-SSCP 多态性检测结果讨论

3.2 三个品种PGR- EXON 4 限制性片段测序结果讨论

4 结论

致谢

参考文献

个人简介

导师简介

独创性声明

发布时间: 2007-03-12

参考文献

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[7].集约化生产方式下无角陶赛特×小尾寒羊羔羊产肉性能和肉质的研究[D]. 杨开伦.新疆农业大学2009
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