HCV多表位复合抗原合成肽的免疫学性状分析

论文摘要

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）引起的世界性传染病之一,研究已明确HCV属于黄病毒,为单股RNA病毒。其基因编码一条完整多肽,包括包膜蛋白E、核心蛋白C和非结构蛋白NS等,经酶切后与基因组RNA一道装配成为完整病毒颗粒。目前全世界共发现的HCV有6个基因型,若干个血清型。我国的主要流行型别为Ⅰ型和Ⅱ型。该类肝炎易转为慢性活动型,并与肝硬化和肝癌关系密切,目前尚无理想的预防措施和特效的治疗方法。因此,早期诊断是防止HCV传播的有效手段。实验室对丙型肝炎的诊断主要依赖于对HCV Ab的检测,但抗体的产生具有“窗口期”的特点,且有部分患者为静默感染（immunosilent infection）,因此,仅检测HCV Ab,很难做到早期诊断、控制血源质量或解决丙肝抗体假阴性的问题。所以开发HCV抗原的检测技术则具有重要意义。 为此,本实验室在早期的工作中,利用HCV结构及非结构蛋白上的7个保守的“核心”表位,构建了一个复合型的多表位抗原,并将其命名为B2,并证明了该抗原不仅能刺激产生CTL反应,而且还能够诱导产生HCV特异性抗体,这种抗体对多数被检HCV亚型都能够准确识别。但缺点是该抗原所诱导的抗体滴度较低,可能是由于其分子量较小,所以本课题将人工合成的HCV复合多表位抗原基因B2克隆到表达载体pThioHisA中,利用硫氧还蛋白融合方式对该抗原进行修饰,并在大肠杆菌中表达融合蛋白（Trx-B2）,纯化该蛋白后免疫小鼠及家兔,结果表明用硫氧还蛋白修饰后的融合蛋白免疫小鼠和家兔后,得到的抗体滴度均高于未经修饰过的复合多表位抗原合成肽所诱导的抗体滴度,并从免疫后的兔血清中提取IgG包被酶联板,利用双抗夹心法分别检测了32份HCV阳性血清和32份正常人的血清,结果阳性率分别为87.5%和43.75%,符合率为71.88%。通过以上实验,我们对该多表位抗原的免疫原性及免疫特异性有了进一步的认识,为深入研究多表位抗原在新型诊断试剂和广谱疫苗方面的应用积累了必要的实验资料,也为今后相关工作的开展奠定了基础。

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