CTGF和HIF-1α在慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小管间质的表达

论文摘要

目的:1.制作慢性马兜铃酸肾病（Chronic aristolochic acid nephrology,CAAN）大鼠模型,观察CAAN大鼠肾脏组织形态改变。2.动态观察CAAN大鼠肾小管间质中转化生长因子-β1（Transforminggrowth factor-β1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（Connective tissue growthfactor,CTGF）、缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和纤维连接蛋白（Fibronectin,FN）的表达情况,探讨它们与CAAN大鼠肾间质纤维化的关系。方法:1.36只Wistar大鼠分2组:①模型组（n=24）,给予关木通水煎剂连续灌胃12周建立CAAN大鼠动物模型;②对照组（n=12）,给予等量自来水连续灌胃12周;在4、8、12、16周末分别处死模型组6只、对照组3只,留取肾组织。2.大鼠肾脏组织常规HE、Masson染色,光镜下观察CAAN组织形态改变并测定肾间质相对面积评价肾间质纤维化程度。免疫组化观察TGF-β1、CTGF、HIF-1α、VEGF和FN的表达,并行半定量分析检测表达量。3.统计学处理:采用SPSS13.0统计软件。计量资料用（?）±s表示,组间差异比较采用t检验;相关性检验采用Pearson相关分析。结果:1.大鼠肾组织形态改变:对照组各大鼠肾小管间质基本正常,各时间点肾间质相对面积分别为0.0639±0.0031、0.0651±0.0029、0.0660±0.0025、0.0700±0.0040。模型组在4周末,小管上皮细胞肿胀,个别上皮细胞坏死脱落,可见核固缩,间质少量炎症细胞浸润。8周末,部分肾小管上皮萎缩、扁平、刷状缘消失,肾间质面积增宽,炎症细胞小灶状浸润。12周末,肾小管多灶状萎缩或消失,管腔扩大,间质明显纤维化,少量炎症细胞浸润。16周末,肾小管大片萎缩、消失,呈现寡细胞性肾间质纤维化。各时间点肾间质相对面积分别为0.0701±0.0069、0.1000±0.0166、0.1667±0.0201、0.3472±0.0355。2.大鼠肾组织免疫组化染色结果:对照组TGF-β1仅有少量表达于肾小管上皮细胞胞浆,CTGF、FN几乎不见表达,HIF-1α在皮髓质交界处的肾小管上皮细胞有少量表达,VEGF广泛表达在肾小管上皮细胞胞浆。模型组TGF-β1表达在肾小管上皮细胞胞浆及间质成纤维细胞、炎性浸润的单个核细胞;早期表达逐渐增多,8周末最为显著（P＜0.01）,此后呈下降趋势,但仍高于同期对照组（P＜0.01）。光镜下观察可见,在12周和16周末关木通组大鼠的同一切片中,越是扁平、萎缩、细胞融合等晚期慢性病变明显的小管上皮,表达TGF-β1阳性颗粒越少。CTGF、HIF-1α、FN表达在肾小管上皮、间质成纤维细胞和少量浸润的炎症细胞,随着时间的延长病变进展,表达量显著增多（P＜0.01）,尤其是病变明显的变性萎缩上皮细胞阳性颗粒表达更多。VEGF持续广泛表达在肾小管上皮细胞胞浆和间质细胞,与对照组相比差异无统计学意义。3.相关性分析:实验组大鼠肾小管间质CTGF、HIF-1α、FN表达量和肾间质相对面积两两正相关:CTGF和HIF-1αr=0.980,CTGF和FN表达量r=0.963,CTGF和肾间质相对面积r=0.966,HIF-1α和FN r=0.958,HIF-1α和肾间质相对面积r=0.971,FN表达量和肾间质相对面积r=0.961,以上均有P＜0.01。结论:1.TGF-β1可能在纤维化的启动中起重要作用,纤维化的进行性发展,则还需要其他更重要因素的存在。2.CTGF介导了TGF-β1致纤维化的作用,参与肾间质纤维化发生发展的全过程,与CAAN大鼠肾间质纤维化有着更为直接的关系。3.HIF-1α通过与CTGF的相互作用参与CAAN大鼠肾间质纤维化,是肾间质纤维化进行性发展的重要因素。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 综述一 马兜铃酸致慢性肾小管-间质损伤的研究进展
• 综述二 缺氧诱导因子-1α与肾脏疾病
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况