论文摘要
转基因技术已发展成为植物育种和分子设计的一种重要手段,当前在葡萄育种中应用的限制因子是再生体系。虽然过去有较多葡萄组织培养的报道,但大多采用侧芽培养的方法,不适合转基因再生要求。本试验以鲜食葡萄品种京亚和克瑞森无核的成年态为试材,经消毒、继代扩繁后,进一步以无菌试管苗的叶片为外植体,建立了叶盘法再生的技术体系,并为转基因技术应用做了部分前期探索。得出以下结论:1.对单芽茎段采用0.1%升汞和2%NaClO进行消毒,设计了不同消毒时间的组合,实验表明用2%NaClO消毒20 min灭菌效果最好。取材在4月中旬至5月中旬污染最低。2.初代培养基:京亚采用MS+6-BA 1.0mg/L,克瑞森采用MS+6-BA 2.0mg/L都能有效的诱导腋芽的萌发。继代增殖培养基:采用MS+6-BA 1.5mg/L+IBA 0.1mg/L可以有效的诱导腋芽的增殖,增殖倍数在5倍以上。3.克服玻璃化:降低温度、增加琼脂含量都能够缓解组培苗的玻璃化,但都不能完全抑制玻璃化,随着温度的升高及继代次数的增加,玻璃化现象仍然严重。在继代增殖培养基中加入0.4mg/L的活性炭,虽然增殖倍数有所降低,但却可以完全抑制玻璃化,同时还可以为叶盘再生提供稳定而健壮的外植体材料。4.葡萄叶盘再生体系:克瑞森无核的叶盘再生最佳培养基为MS+6-BA5.0mg/L+IBA0.05mg/L,再生率为11.2%;京亚叶盘再生的最佳培养基为MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.05mg/L,再生率为65.2%。前2片展开叶是最理想的外植体,只切断叶片主脉而不将叶片完全切断、将叶片背面接触培养基也可以提高再生率。5.叶片再生芽生根的适宜培养基为1/2MS+IBA 1.0mg/L+7g/L Agar+30g/LSuc,处理须根多,茎杆粗壮,生根效果最为理想。6.遗传转化摸索发现:卡那霉素不适合京亚叶片再生筛选,只适合于生根筛选,浓度为10mg/L;Cef抑菌浓度为300 mg/L。
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摘要Abstract缩略词表1 前言1.1 问题的提出1.2 葡萄高效离体再生系统的研究进展1.2.1 葡萄高效离体再生系统的类型1.2.2 高效离体再生系统的影响因素1.3 葡萄基因工程研究进展1.3.1 葡萄遗传转化受体系统1.3.2 遗传转化途径1.3.3 葡萄转化的主要影响因素1.3.4 转化组织的有效筛选和检测1.4 本研究的目的及意义2 材料与方法2.1 成年态离体培养体系建立2.1.1 试验材料2.1.3 试验方法2.2 葡萄的叶盘再生2.2.1 不同激素配比对叶片再生的影响2.2.2 不同基本培养基对叶片再生的影响2.2.3 暗培养时间对京亚葡萄叶片再生的影响2.2.4 京亚葡萄不同叶位的再生情况2.2.5 不同叶片切法对京亚葡萄再生的影响2.2.6 叶片不同放置方式对京亚葡萄再生的影响2.2.7 再生芽的伸长及扩繁2.2.8 再生芽的生根2.2.9 炼苗移栽2.3 培养条件2.4 京亚葡萄叶片转化体系初步探索2.4.1 根癌农杆菌菌株及质粒2.4.2 Km浓度筛选2.4.3 农杆菌的活化和工程菌液的制备2.4.4 抑菌试验2.4.5 侵染时间、菌液浓度的探索2.5 试验观察结果及数据统计方法2.5.1 试验观察结果2.5.2 统计分析3 结果与分析3.1 成年态离体培养体系的建立3.1.1 不同消毒方法对葡萄污染、褐化及成活率的影响3.1.2 不同取材时期对葡萄污染、褐化及成活率的影响3.1.3 初代培养基的筛选3.1.4 不同激素配比对外植体增殖的影响3.1.5 几种控制玻璃化的措施对抑制玻璃化现象的效果3.2 叶盘法再生体系的建立3.2.1 不同细胞分裂素对叶片再生的影响3.2.2 不同激素配比对叶片再生的影响3.2.3 基本培养基对叶片再生的影响3.2.4 不同叶位对京亚葡萄叶片再生的影响3.2.5 不同暗培养天数对京亚葡萄叶片再生的影响3.2.6 不同放置方法对京亚葡萄叶片再生的影响3.2.7 不同的切法对京亚葡萄叶片再生的影响3.2.8 叶片再生芽的生根3.2.9 炼苗移栽3.3 叶片遗传转化体系的初步探索3.3.1 Km浓度的筛选3.3.2 抑菌试验 Cef浓度的确定3.3.3 侵染时间及农杆菌浓度的筛选4 讨论4.1 葡萄无菌系建立的影响因子4.2 葡萄叶盘法再生系统建立的影响因子4.3 葡萄转化体系初步探索4.4 褐化是制约葡萄转基因体系建立主要因素5 小结参考文献图版和图版说明致谢附录 Ⅰ
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标签:葡萄论文; 组织培养论文; 叶片再生论文; 不定芽论文;