带有荧光标签的NPFF2受体重组细胞模型建立

论文摘要

神经肽FF （Neuropeptide FF, NPFF, FLFQPQRFa）,是最初分离自牛脑中的神经肽,属于RF氨基肽家族,在物种进化过程中高度保守。NPFF在疼痛、阿片肽功能调节、体内体液平衡、摄食行为。心血管功能等许多生理反应中发挥作用。NPFF在体内有两种受体NPFF1和NPFF2,两者都属于G蛋白偶联受体家族,其序列间存在50%的相似性,并优先与Gi/o形成的三聚体结合。从目前的分子生物学技术以及药理学和生理学的实验数据,支持NPFF2受体是NPFF的主要受体,而NPFF1受体的天然配体为NPAF。为了进一步从细胞水平上研究NPFF各种生理功能的分子机制,以及NPFF-NPFFR2系统的信号转导机制,我们克隆了NPFFR2并构建带有青色荧光蛋白的真核表达载体pECFP-C 1-HA-NPFFR2,经测序鉴定无误后转染CHHO细胞系,通过抗性筛选得到稳定表达带有青色荧光蛋白标签（CFP）的NPFFR2的重组细胞系。经DNA水平、RNA水平和蛋白表达水平验证表明CFP-NPFFR2在该重组细胞上存在稳定表达。初步信号通路研究表明,NPFF可刺激细胞上NPFFR2并激活MAPK/ERK信号通路。该CFP-NPFFR2重组细胞系的建立为NPFF系统的信号转导研究奠定了良好的基础,并为NPFF的构效研究提供了有力的研究平台。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 NPFF系统简介
• 1.2 NPFF系统的发现
• 1.3 NPFF系统的分布
• 1.4 NPFF系统的功能
• 1.5 NPFF阿片肤调节作用的机制
• 1.6 MAPK通路简介
• 第二章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.2 实验方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 pECFP-C1-HA-NPFFR2重组载体构建结果
• 3.2 稳定表达NPFFR2的CHO细胞株构建结果
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 附录Ⅰ
• 附录Ⅱ
• 附录Ⅲ
• 在学期间的研究成果
• 致谢