沼液对草莓土传病害的防治效果及机理研究

论文摘要

沼气工程有着悠久的应用历史,沼液在农业上的应用有着重要的意义,其丰富的营养成分可以作为肥料提高作物质量,可以防治植物病害,对病原真菌有抑制作用,其抑制机理以及在实际种植中的防治效果成为人们关注的焦点。本文利用采用菌丝生长抑制和孢子萌发抑制的试验方法,以草莓枯萎病原菌为对象,研究了来自江苏省内运行稳定的21个大型沼气工程的沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌的生长抑制特性,阐明其药效因子。以草莓枯萎病菌、疫霉病菌、腐霉病菌、炭疽病菌、立枯病菌作为指示菌从14个沼液中筛选抗菌谱较广的拮抗芽孢细菌并对其进行分子鉴定。利用两种原料沼液原液以及辐照沼液,拮抗菌展开室外对草莓枯萎病盆栽防效实验。设置不同梯度浓度的草莓枯萎病菌分生孢子液在两种类型土壤中的分子检测。所有沼气工程的沼液对草莓枯萎病菌的菌丝生长都有不同程度的抑制作用,不同运行年限的沼气池沼液以及不同发酵原料的沼液对草莓枯萎病菌的抑制效果均无显著差异,但不同贮液阶段的沼液对其抑菌效果影响显著。沼液的无菌滤液对草莓枯萎病菌菌丝的生长没有抑制效果；沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子的萌发均有不同程度的抑制作用,猪粪沼液及其无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的抑制作用好于牛粪沼液。沼液对生产上常见的五种土传病原真菌的抑制效果有显著差别。沼液中的拮抗微生物是沼液抑菌防病的主要因子。从14处沼液中共分离获得83株芽孢细菌,其中22株为拮抗细菌,4株芽孢细菌抗菌谱较广,经16SrDNA鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、解淀粉胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。猪粪沼液的防效好于牛粪沼液,两种沼液经辐照灭菌后防效均低于未辐照沼液,多粘芽孢杆菌处理与多粘芽孢杆菌加猪粪水沼液处理防效较好。分生孢子浓度为102个／g土是粘土中草莓枯萎病菌分生孢子的检测底线,不是沙土中草莓枯萎病菌分生孢子的检测底线。降低草莓枯萎病菌分生孢子浓度寻找沙土的检测底线。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 概述沼液基本概念,来源,沼气工程发展现状
• 1.1.1 国内沼气工程发展现状
• 1.1.2 国外沼气工程发展现状
• 1.2 沼液目前国内外的应用状况及意义
• 1.2.1 沼液目前国内外综合利用现状
• 1.2.2 沼液在种植业上的应用
• 1.2.3 沼液在养殖业上的应用
• 1.2.3.1 沼液养猪
• 1.2.3.2 沼液养鱼
• 1.2.4 沼液综合利用的意义
• 1.2.4.1 生态破坏加剧
• 1.2.4.2 工农业废弃物污染严重
• 1.3 沼气工程在保护农业生态上的作用
• 1.3.1 保护森林资源,减少水土流失
• 1.3.2 防止农村面源污染
• 1.3.3 降低农业生产成本
• 1.4 草莓连作障碍国内外研究现状
• 1.4.1 土传病害的研究
• 1.4.2 连作障碍发生的原因
• 1.4.2.1 微生物
• 1.4.2.2 土壤次生盐渍化及酸化
• 1.4.2.3 植物自毒作用
• 1.5 草莓土传病害目前传统普遍的防治方法
• 1.5.1 物理防治
• 1.5.1.1 太阳能高温消毒
• 1.5.1.2 土壤电液爆处理技术
• 1.5.1.3 土壤微水分电处理技术
• 1.5.4 化学防治
• 1.5.5 生物防治
• 1.6 利用沼液防治病害的意义
• 1.7 本研究的意义和目的
• 2 引言
• 3 材料和方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 沼液
• 3.1.2 病原菌
• 3.1.3 培养基
• 3.1.4 两种土壤类型
• 3.1.5 草莓苗
• 3.2 试剂
• 3.3 主要仪器设备
• 3.4 试验方法
• 3.4.1 江苏省大型沼气工程的调查及样品采集
• 3.4.2 沼液对草莓枯萎病菌菌丝的生长抑制试验
• 3.4.3 沼液无菌滤液对草莓枯萎病菌菌丝生长抑制试验
• 3.4.4 沼液上清液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的影响
• 3.4.5 沼液无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的影响
• 3.4.6 沼液对五种植物病原真菌的生长抑制作用及拮抗菌预筛选
• 3.4.7 不同地点沼液及长期施用牛粪沼液的草莓种植土中芽孢细菌的分离
• 3.4.7.1 沼液中芽孢细菌的分离
• 3.4.7.2 长期施用牛粪沼液的草莓种植土中芽孢细菌分离
• 3.4.8 沼液及长期施用牛粪沼液的草莓种植土中拮抗芽孢细菌的筛选（抗菌谱测定）
• 3.4.8.1 沼液中拮抗细菌的筛选
• 3.4.8.2 草莓长期施用牛粪沼液的草莓种植土拮抗芽孢细菌的筛选
• 3.4.9 广谱拮抗芽孢细菌的分子鉴定
• 3.4.9.1 广谱拮抗细菌总DNA的提取
• 3.4.9.2 细菌16S rDNA扩增
• 3.4.10 两种原料的沼液对草莓枯萎病盆栽防效
• 3.4.10.1 两种原料沼液对枯萎病盆栽防效一
• 3.4.10.2 两种原料沼液对枯萎病盆栽防效二
• 3.4.11 两种土壤类型中两种原料的沼液及拮抗菌与沼液复配对草莓枯萎病盆栽防效
• 3.4.11.1 马干土中开展沼液及拮抗菌对草莓枯萎病盆栽防效实验
• 3.4.11.2 沙土中开展中开展沼液及拮抗菌对草莓枯萎病盆栽防效实验
• 3.4.12 草莓枯萎病菌在两种土壤类型中的分子检测
• 3.4.12.1 土壤样品前处理
• 3.4.12.2 土壤样品的总DNA提取
• 3.4.12.3 镰刀菌特异引物PCR扩增
• 4 结果与分析
• 4.1 江苏省大型沼气工程的调查及样品采集
• 4.2 沼液对草莓枯萎病菌菌丝生长及分生孢子萌发的抑制作用
• 4.2.1 不同运行年限、不同原料的沼气工程沼液对草莓枯萎病菌的生长抑制作用
• 4.2.2 氧化塘沼液对草莓枯萎病菌菌丝生长抑制的影响
• 4.3 沼液无菌滤液对草莓枯萎病菌菌丝生长抑制试验
• 4.4 沼液上清液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的影响
• 4.5 沼液无菌滤液对草莓枯萎病菌分生孢子萌发的影响
• 4.6 沼液对五种植物病原真菌的生长抑制作用及拮抗菌预筛选
• 4.7 不同地点沼液及长期施用牛粪水沼液草莓种植土芽孢细菌的分离
• 4.7.1 不同地点沼液中芽孢细菌的分离
• 4.7.2 草莓长期施用牛粪水沼液种植土芽孢细菌的分离
• 4.8 沼液及草莓长期施用牛粪水沼液种植土中拮抗芽孢细菌的筛选（抗菌谱测定）
• 4.8.1 沼液中拮抗细菌的筛选
• 4.8.1.1 沼液拮抗芽孢细菌初筛
• 4.8.1.2 沼液拮抗芽孢细菌复筛（抗菌谱测定）
• 4.8.2 草莓长期施用牛粪水沼液种植土芽孢细菌的筛选
• 4.8.2.1 草莓长期施用牛粪水沼液种植土芽孢细菌的初筛
• 4.8.2.2 草莓长期施用牛粪水沼液种植土芽孢细菌的复筛
• 4.9 广谱拮抗芽孢细菌的分子鉴定
• 4.10 两种原料的沼液对草莓枯萎病盆栽防效
• 4.10.1 两种原料沼液对枯萎病盆栽防效一
• 4.10.2 两种原料沼液对枯萎病盆栽防效二
• 4.11 两种土壤类型中两种原料的沼液及拮抗菌与沼液复配对草莓枯萎病盆栽防效
• 4.11.1 马干土中沼液及拮抗菌与沼液复配对草莓枯萎病盆栽开展防效
• 4.11.2 沙土中沼液及拮抗菌与沼液复配对草莓枯萎病盆栽开展防效
• 4.12 草莓枯萎病菌在两种土壤类型中的分子检测
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• ABSTRACT