激素性股骨头坏死基因表达变化及右归饮调控作用的实验研究

论文摘要

目的通过基因芯片寻找大鼠激素性股骨头坏死组织中表达变化的基因,尝试探究激素诱发股骨头坏死的始动因素和分子机制。并用右归饮进行干预,观察右归饮对大鼠激素性股骨头坏死基因表达谱的调控作用,探究右归饮预防和治疗激素性股骨头坏死的分子机制。方法30只成年健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和右归饮组。每组10只,模型组大鼠和右归饮组大鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素后,于左侧臀肌注射大剂量甲基强的松龙的方法建立激素性股骨头坏死模型,正常对照组大鼠给与腹腔注射大肠杆菌内毒素后,于左侧臀肌注射相同剂量生理盐水。造模后右归饮组给与右归饮灌胃,模型组和正常组给与相同剂量的生理盐水灌胃。6周后取各组大鼠的左侧股骨头标本进行组织病理学观察,抽提各组大鼠股骨头组织的rnRNA,经反转录获得大鼠股骨头组织cDNA探针,进行基因芯片检测。检测结果经荧光定量PCR验证,并用GO（gene ontology）分类方法对差异表达的基因进行分析。结果与正常组相比,模型组有190条基因的表达存在显著变化,且主要表现为下调表达,其中的52条基因上调表达,138条基因下调表达。这些差异表达基因中102条基因为已知基因（已在GeneBank中登录）,88条为未知基因。已知基因根据其生物学功能可被分为：氧化应激、细胞凋亡、信号转导、细胞外基质和脂代谢等基因家族。RT-PCR验证结果与基因芯片检测结果相符。右归饮组与模型组相比,92条基因的表达存在显著差异,且主要表现为上调表达。经GO分类方法分析后发现右归饮组／模型组差异表达基因涉及的生物过程主要包括细胞凋亡、信号转导、代谢、细胞增殖分化、细胞周期、凝血和抗氧化损伤等。RT-PCR验证结果与基因芯片检测结果相符。结论激素性股骨头坏死是一个复杂的动态过程,受多种因素和多条信号通路的影响,涉及各种基因的表达变化。右归饮能调控激素性股骨头坏死的基因表达和细胞内外信号传导过程,这可能是右归饮防治激素性股骨头坏死的分子机制。从基因表达角度解释了中药防治激素性股骨头坏死的药效机理,丰富了“肾主骨”理论。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 大鼠激素性股骨头坏死基因表达变化的研究
• 一、材料和方法
• （一） 实验材料
• 1. 实验动物
• 2. 主要实验仪器
• 3. 主要实验试剂
• 4. 实验试剂的配置
• （二） 实验方法
• 1. 大鼠药物用量换算
• 2. 实验动物分组及动物模型制备
• 3. 股骨头标本的取材及处理
• 4. 股骨头标本的组织病理学观察
• 5. 股骨头标本的基因芯片检测
• 6. 股骨头标本的荧光定量PCR检测
• 7. 股骨头标本的免疫组化检测
• （三） 实验数据统计处理
• 二、实验结果
• （一） 股骨头标本组织病理学观察结果
• （二） 股骨头标本基因芯片检测结果
• （三） 股骨头标本荧光定量PCR检测结果
• （四） 股骨头标本免疫组化检测结果
• 三、分析与讨论
• （一） 动物模型的选择
• 1. 动物模型的重要性
• 2. 造模动物和造模方法的选择
• （二） 大鼠激素性股骨头坏死的基因表达变化及其影响
• 四、第一部分研究小结
• 第二部分 右归饮对大鼠激素性股骨头坏死基因表达谱的调控作用
• 一、材料和方法
• （一） 实验材料
• 1. 实验动物
• 2. 主要实验试剂
• 3. 主要实验仪器
• 4. Alcian Blue染色试剂配制
• （二） 实验方法
• 1. 右归饮的制备及工艺研究
• 2. 实验动物分组、动物模型的制备及给药方法
• 3. 股骨头标本的取材及处理
• 4. 股骨头标本的组织病理学观察
• 5. 股骨头标本的基因芯片检测
• 6. 股骨头标本的荧光定量PCR检测
• 7. 股骨头标本的Alcian Blue染色
• （三） 实验数据统计处理
• 二、实验结果
• （一） 股骨头标本组织病理学观察结果
• （二） 股骨头标本基因芯片检测结果
• （三） 股骨头标本荧光定量PCR检测结果
• （四） 股骨头标本Alcian Blue染色结果
• 三、分析与讨论
• （一） 激素性股骨头坏死的发病与"肾主骨"理论的关系
• （二） 右归饮对激素性股骨头坏死动物模型的影响
• （三） 右归饮对大鼠激素性股骨头坏死基因表达谱的调控作用
• 四、第二部分研究小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 文献综述
• 参考文献