论文摘要
鸭疫里默氏杆菌病（Riemerella anatipestifer infection）是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）引起的幼鸭急性或慢性败血性传染病,又称鸭传染性浆膜炎,是严重危害养鸭业的传染病之一。该病的发病率可达90%以上,死亡率一般在5%～75%之间,除可引起1～8周龄鸭死亡外,还可引起输卵管炎,造成成年鸭产蛋率下降,耐过鸭多成僵鸭,生长迟缓,给养殖户造成了极大的经济损失。药物是预防和治疗该病的主要措施,但反复用药增加了饲养成本,且易产生耐药性,导致药物残留超标,危害食品安全,所以对雏鸭进行免疫接种成为控制该病的一种发展方向。近些年来,国内外学者都致力于RA疫苗的研究。由于RA血清型复杂,各血清型之间缺乏交叉保护,所以选择发病地区鸭场流行的优势血清型制备疫苗成为疫苗研制的关键。而制苗用菌株大批量、高质量的增菌培养又成为降低疫苗生产成本,提高疫苗免疫效果的另一关键。本研究通过对鸭疫里默氏杆菌GN52株（血清10型）进行液体培养和免疫原性研究,确定了鸭疫里默氏杆菌适宜的增菌培养基,建立了高密度发酵RA的液体培养技术,确定了鸭疫里默氏杆菌病灭活疫苗的生产工艺规程。本研究通过对比试验确定了一种增菌效果较好的培养基。在前期流行病学调查的基础上,采用从发病地区分离的优势血清型10型菌株（RA GN52株）分别用改良马丁肉汤、改良酵母肉汤和P-L肉汤三种液体培养基进行增菌培养,比较其增菌效果。结果表明,改良酵母肉汤的增菌效果比改良马丁肉汤和P-L肉汤的好,测定细菌的生长曲线,RA GN52株在改良酵母肉汤中培养24h达生长高峰,菌液含量可达270×108～320×108CFU/ml。本研究建立了高密度发酵RA的液体培养技术。利用液体发酵装置对RA进行增菌培养,通过染色镜检、活菌计数、OD450值测定、PH值测定等方法对RA的生长曲线进行摸索,确定培养方法、最佳收菌时间及最佳灭活条件。结果表明,RA在培养过程中,菌液PH值基本不变;37℃液体发酵培养20h活菌含量最高,可达320～350亿CFU /ml;0.3%甲醛37℃灭活18h为最佳;OD450值与活菌数之间存在一定的函数关系,可通过测定RA菌液的OD450值推算其活菌数。本研究研制了产生抗体快,保护率高,免疫持续时间长,保存期长的鸭疫里默氏杆菌病灭活疫苗。RA GN52株经改进的液体培养工艺进行增菌后,制备油乳剂灭活疫苗,经无菌和安全检验合格后,进行免疫原性研究。结果表明,对3日龄雏鸭颈部皮下注射0.3ml/羽即可产生良好的免疫应答,免疫后7d用同源菌株攻击保护率可达70%,14d达100%,至56d免疫保护率仍可达80%。于10日龄进行第2次免疫,二免后3d免疫保护率达100%。疫苗免疫雏鸭后能够显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）的增强其T细胞的免疫力,时间达2周。疫苗在4～8℃可保存1年,保存6个月和1年的保护率分别达95%和85%。该疫苗经田间试验,效果良好。