论文摘要
人白细胞介素-2（HuIL-2）主要是由激活的T淋巴细胞产生的一种淋巴因子,在机体免疫应答中起重要作用,能诱导T淋巴细胞增殖（从G0期到S期）和分化,并且具有刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞分泌细胞因子等功能,因而具有广泛的生物学活性,在临床上具有抗肿瘤、抗感染及增强机体免疫功能等作用。天然IL-2由133个氨基酸残基组成,在58、105和125位各有一个半胱氨酸（Cys）,其中58位和105位形成二硫键是IL-2生物活性所必需,125位半胱氨酸的存在易形成错配或二聚体,使IL-2活性丧失,因此将125位半胱氨酸突变为丝氨酸可以消除形成错配或二聚体的分子基础,便于纯化。 动物乳腺生物反应器以其生产成本低、产量高且表达产物接近天然产物而日益受到人们重视。但建立乳腺生物反应器是一项周期长、耗资大的工作,而且外源基因的随机表达也给这项工作带来很大麻烦,因此在建立大型转基因动物个体之前,先用小动物鉴定所构建载体的可行性十分必要。 本研究用PCR定点突变法将天然人白细胞介素-2的125位半胱氨酸突变为丝氨酸,得到Ser-125突变型人白细胞介素-2（Ser-125 HuIL-2）cDNA,并从山羊新鲜血液中扩增到867bp的β-乳球蛋白（BLG）基因的上游调控序列,然后将Ser-125突变型人白细胞介素-2 cDNA与山羊β-乳球蛋白（BLG）基因的上游调控序列融合,构建了pBLG—Ser-125HuIL-2乳腺定位表达载体。表达载体经纯化后用脂质体包裹,经乳腺导管注入妊娠后期的家兔和山羊乳腺内,进行瞬时表达。分别于家兔和山羊分娩后1～10d采奶,用ELISA方法检测乳汁中Ser-125HuIL-2含量。家兔共做了6只,其中1只作为空白对照,1只注射脂质体包裹的pIL-2质粒,2只注射表达载体,2只注射脂质体包裹的表达载体,结果注射空白对照和pIL-2质粒的2只家兔均未表达;2只直接注射表达载体的家兔1只有表达,含量为0.06～0.53μg/L,1只未表达,表达成功率50%（1/2）;