论文摘要
目的选择培养的人骨骼肌细胞及SD大鼠复制胰岛素抵抗模型,从分析葡萄糖-脂肪代谢着手,考察胰岛素敏感性指数、脂联素分泌及葡萄糖转运蛋白-4表达、转位等的变化,从而探讨复方丹参滴丸改善胰岛素抵抗的作用及机制。方法采取组织贴块法培养的人骨骼肌细胞（HSMCs）,用含20%小牛血清的高糖高胰岛素RPMI 1640培养基(葡萄糖2.5×10-2mol·L-1,胰岛素100 U·L-1)模拟胰岛素抵抗。分别设细胞对照,吡格列酮(10-4mol·L-1),丹参素(1.0 g·L-1),三七皂苷R1(1.0 g·L-1)及复方丹参滴丸浸膏低、中、高剂量(0.1 g·L-1、0.5 g·L -1、1.0 g·L-1)7个处理组（n=6）。己糖激酶法测定细胞培养上清液中葡萄糖含量,逆转录一聚合酶链法测定肌细胞葡萄糖转运蛋白-4 mRNA表达。将SD大鼠随机分为正常组和造模组。正常组肌注生理盐水;造模组采用地塞米松长期作用(1 mg·kg-1,隔日1次肌注,共4次)建立胰岛素抵抗模型。己糖激酶法测定空腹血糖、放射免疫法空腹胰岛素,计算胰岛素敏感性指数,小于正常组胰岛素敏感性指数均数加1个标准差者视为造模成功。造模成功大鼠随机分为模型对照、吡格列酮(20 mg·kg-1)、丹参注射针(12.5 ml·kg-1)及复方丹参滴丸浸膏(0.5 g·kg-1)4个处理组（n=5）。给药8周后,分别测定体重、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白（试纸条机测）、胆固醇和甘油三酯（脂酶法）、脂联素浓度（酶联免疫吸附法）以及大鼠后肢股四头肌细胞葡萄糖转运蛋白-4 mRNA表达、胞膜转位（实时一聚合酶链法）。结果高糖高胰岛素培养可以诱导HSMCs产生胰岛素抵抗,表现为细胞Glut-4 mRNA的表达下降（与正常对照组比较:0.52±0.04 vs 0.85±0.02,P<0.01）,细胞培养上清液中的葡萄糖含量增加(与正常对照组比较:27.1±0.9 vs 12.9±0.3,mmol·L-1,P<0.01)。吡格列酮、丹参素及中、高剂量复方丹参滴丸干预后,胰岛素抗性HSMCs的Glut-4 mRNA表达均增加（P<0.01）,培养基中HSMCs上清液的葡萄糖含量下降（P<0.05）。中、高剂量复方丹参滴丸与吡格列酮三组间无明显差异（P>0.05）,但丹参素的作用较弱。低剂量复方丹参滴丸与三七皂苷R1干预后,胰岛素抗性细胞的Glut-4 mRNA表达及培养基中细胞上清液的葡萄糖含量与模型对照组比较无明显差异（P>0.05）。地塞米松诱导的大鼠出现胰岛素抵抗时,空腹血糖和空腹胰岛素明显增高,胰岛素敏感性指数降低（与正常对照组比较:-7.58±0.07 vs -6.58±0.20,P<0.05）、糖化血红蛋白升高及胆固醇、甘油三酯升高,脂联素分泌减少(与正常对照组比较:5.06±0.52 vs 9.18±0.40,ng·mL-1,P<0.01),骨骼肌细胞Glut-4 mRNA的表达及胞膜转位明显降低（0.302±0.05 vs 0.165±0.01,0.109±0.01 vs 0.017±0.01,P<0.01）。吡格列酮、丹参注射针及复方丹参滴丸分别干预胰岛素抵抗大鼠后,大鼠的空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素敏感性指数、糖化血红蛋白、胆固醇和甘油三酯均有不同程度的改善（P<0.05, P<0.01）。复方丹参滴丸与吡格列酮两组还明显促进脂联素分泌（P<0.05）,增强骨骼肌Glut-4 mRNA的表达、胞膜转位（P<0.01）,且两组间无明显差异（P>0.05）;丹参注射针亦可促进脂联素分泌（P<0.05）,增强骨骼肌Glut-4 mRNA的表达、胞膜转位（P<0.05, P<0.01）,但其作用有明显低于复方丹参滴丸和吡格列酮（P<0.05）。结论复方丹参滴丸明显增强高糖高胰岛素诱导的人骨骼肌胰岛素抵抗细胞葡萄糖转运蛋白-4 mRNA表达,促进糖利用,说明了复方丹参滴丸在细胞水平可调节糖代谢,具有改善胰岛素抵抗的作用。复方丹参滴丸明显降低地塞米松诱导的胰岛素抵抗大鼠总胆固醇和甘油三酯,促进脂联素分泌,增强骨骼肌葡萄糖转运蛋白-4 mRNA表达、胞膜转位,说明了复方丹参滴丸在整体动物中可调节糖脂代谢,提高胰岛素敏感性,发挥改善胰岛素抵抗的作用。