利用胚胎干细胞特异性MicroRNA提高猪体细胞重编程效率的研究

论文摘要

体细胞重编程技术可以将分化末端的体细胞重编程转变回多潜能状态,再通过定向分化可获得特定类型的细胞,这一技术在再生医学领域具有十分重要的应用前景。目前可将体细胞进行重编程的方法主要有：体细胞核移植技术（somatic cell nuclear transfer, SCNT）、体细胞与干细胞融合、细胞提取物诱导、限定转录因子进行诱导等。猪作为我国重要的经济动物,无论在农业还是生物医学应用上都具有重要研究意义。但是目前利用体细胞核移植技术对猪的体细胞进行重编程存在效率低等问题。猪的胚胎干细胞（embryonic stem cell, ES细胞）至今未能建系,这也说明我们对猪的发育及重编程机制尚不明了,亟待进一步的研究。本实验通过体细胞核移植和诱导多潜能干细胞（induced pluripotent stem cell, iPS）技术研究了胚胎干细胞特异性的mircoRNAs（miRNAs）对猪体细胞重编程效率的影响。结果显示：（1）体细胞核移植技术可以有效地将猪体细胞进行重编程,使其重新获得分化发育能力,并获得克隆猪。但是存在重编程效率低,实验操作繁琐,实验周期长等问题。（2）将四种因子通过逆转录病毒导入猪体细胞内,可有效地将猪胎儿成纤维细胞重编程,形成具有类似人ES细胞的多潜能性的iPS细胞。（3）miR302a+miR-302b和miR200c可有效提高4因子诱导的重编程效率,可将诱导效率由0.01%-0.05%提高至0.2%-0.3%,出现原始克隆的时间由12天缩短到10天。（4）miR302a+miR302b+miR-200c可有效提高3因子诱导的重编程效率,将诱导效率从0.001%-0.005%提高至0.01%-0.05%,出现原始克隆的时间由14天缩短到12天。本研究探讨了miRNAs对猪体细胞重编程效率的影响,为提高猪体细胞重编程效率、探索重编程机制、建立安全高效的诱导多潜能细胞提供了实验依据。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一篇 综述部分
• 第1章 体细胞重编程研究进展
• 1.1 体细胞核移植
• 1.2 细胞融合
• 1.3 提取物诱导
• 1.4 限定因子诱导
• 1.5 问题与展望
• 第2章 诱导多潜能干细胞技术的研究进展
• 2.1 诱导多潜能干细胞技术的建立
• 2.2 iPS技术研究进展
• 2.3 识别和鉴定重编程细胞的方法
• 2.4 iPS细胞的应用
• 2.5 iPS技术展望
• 第3章 microRNAs的研究进展
• 3.1 miRNAs的生物合成
• 3.2 miRNAs作用机制
• 3.3 miRNAs靶基因的筛选
• 3.4 miRNAs与癌症
• 3.5 miRNA与干细胞
• 3.6 miRNAs的应用
• 第二篇 实验研究
• 第1章 利用体细胞核移植技术对猪体细胞重编程的研究
• 1.1 材料与方法
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 小结
• 第2章 利用特定转录因子对猪体细胞进行重编程
• 2.1 材料与方法
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第3章 利用胚胎干细胞特异性microRNA提高猪体细胞重编程效率
• 3.1 材料与方法
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• 在读硕士期间发表论文