论文摘要
目的促血管生成素是特异性作用于血管内皮细胞的生长因子，它是由123个氨基酸组成的碱性蛋白，属于核糖核酸超家族，包括四个成员，即Ang-1，Ang-2，Ang-3，Ang-4。Ang-1和Ang-2是目前研究较多的两个因子，其与血管的发生和生成关系密切，尤其Ang-2通过影响肿瘤组织中新生血管的形成而对肿瘤的发生、发展及转移有较大的影响。本研究主要检测Ang-1和Ang-2在外阴鳞癌、外阴上皮内瘤变、外阴上皮内非瘤变及外阴正常皮肤的表达，来探讨它们在外阴不同病变的作用。材料与方法一、实验对象随机选取1996年1月至2006年1月于中国医科大学附属第一医院病理教研室经手术切除及活检存档的蜡块：外阴鳞状细胞癌（VSCC）30例；外阴上皮内瘤变（VIN）35例，其中VINⅠ-VINⅡ共20例，VINⅢ15例；外阴上皮内非瘤样变（NNEDV）40例，其中鳞状上皮增生（SH）20例，硬化性苔藓（LS）20例；外阴正常皮肤10例。收集VSCC患者的临床病理资料进行统计学分析，包括：年龄、临床分期、病理分级、有无淋巴结转移。二、实验方法1、免疫组织化学法（SABC法）浓缩型兔抗人Ang-1和Ang-2、CD34多克隆抗体均购自武汉博士德公司。SABC法免疫组化染色严格按照操作规范进行，设置阳性和阴性对照以保证染色结果的可靠。2、结果判定（1） Ang-1和Ang-2蛋白的表达：Ang-1和Ang-2蛋白定位于细胞浆，呈棕黄色或出现明确的棕黄色颗粒为阳性（+），否则视为阴性（-）。随机选取5个高倍镜视野（40×10），计数每个高倍视野下的阳性细胞数，然后取5个视野阳性细胞的平均数计为该例阳性细胞数。（2） CD34标记的MVD计数：①CD34蛋白表达阳性以血管内皮细胞呈棕色或棕黄色染色为标准；②微血管计数以被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为1个血管计数。只要结构不相连，其分支结构也计作一个血管计数。肿瘤内硬化区及与肿瘤交界处软组织内的微血管，若有较厚的平滑肌及管腔直径大于8个红细胞的微血管除外；③随机选取5个高倍镜视野（40×10），分别计数微血管数，取其平均值计为该例的MVD值。3、统计学处理所有数据用SPSS13.0软件进行处理，各组计量资料采用t检验分析，P＜0.05有统计学意义。结果1、Ang-1和Ang-2在外阴癌前疾病和外阴鳞癌中的表达Ang-1主要定位于细胞浆，呈棕黄色颗粒。Ang-1在外阴正常皮肤组织中并不表达。在NNEDV组织中主要表达于真皮层，LS中的阳性细胞数为8.56±4.75，SH中的阳性细胞数为4.67±2.43；在VIN中，表皮异型细胞无表达，而在其下的真皮层有表达，VINⅠ-Ⅱ的阳性细胞数为8.51±3.35，而VINⅢ的阳性细胞数为29.10±4.56，两者相比有显著性差异（P＜0.05）。在VSCC中Ang-1主要表达于肿瘤组织周围的大血管和癌组织内的肿瘤细胞中，阳性细胞数为38.97±5.85。Ang-2主要定位于细胞浆，呈棕黄色颗粒。Ang-2在正常外阴皮肤组织中无表达。在NNEDV中主要表达于真皮层，LS中的阳性细胞数为7.38±3.41，在SH中的阳性细胞数为4.70±2.58，两者相比有显著性差异（P＜0.05）；Ang-2在VIN中主要表达于真皮层，表皮层则无表达，VINⅠ-Ⅱ的阳性细胞数为8.23±4.43，VINⅢ的阳性细胞数为24.66±4.79，两者相比有显著性差异（P＜0.05）；Ang-2在VSCC中主要表达于癌细胞和癌周边血管内皮细胞中，阳性细胞数为34.33±4.62。2、CD34在外阴癌前疾病和外阴鳞癌中的表达情况正常外阴皮肤组织中的MVD值为20.44±3.66，LS中MVD的值为10.34±2.83，两者相比有显著差异（P＜0.05）；SH的MVD值为21.58±2.48，与正常外阴皮肤相比无显著性差异（P＞0.05）；VINⅠ-Ⅱ为21.83±3.18，VINⅢ为34.71±4.01，两者相比有显著性差异（P＜0.05）；VSCC中的MVD值为39.88±7.65。3、Ang-1和Ang-2的表达与外阴鳞癌的临床病理特征的关系Ang-1的表达与VSCC患者的年龄、病理分级、临床分期及有无淋巴结转移无关（P＞0.05）。Ang-2在高分化癌组织中的阳性细胞数为36.00±4.64，在中分化癌组织中为31.12±4.02，在低分化癌组织中为65.70±3.91，高、中分化与低分化相比有显著性差异（P＜0.05）。Ang-2在有淋巴结转移组的阳性细胞数为41.45±7.02，在无淋巴结转移组的阳性细胞数为30.46±6.38，两者相比有显著性差异（P＜0.05）。结论1、在正常外阴皮肤组织中促血管生成素诱导血管形成系统处于相对静止状态；2、外阴硬化性苔藓中可能存在微循环障碍，后者导致的缺血缺氧诱导Ang-2表达上调，Ang-2可能协同VEGF，促进新生血管形成；3、Ang-1在外阴鳞状上皮增生中并没有起到抗炎因子引起的抗血管渗漏作用；4、Ang-1和Ang-2参与外阴上皮内瘤样病变真皮内的血管形成过程；5、Ang-2的表达与外阴鳞癌的浸润转移和恶性进展有关。
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