论文摘要
目的:本项研究旨在通过研究镉中毒人脐静脉内皮细胞的氧化损伤和细胞凋亡的影响及亚慢性镉中毒大鼠血管内皮细胞的自由基相关指标以及端粒酶活性变化,而且研究导师张静生教授验方冠心康的防护作用,探讨镉中毒对血管内皮细胞衰老的影响及冠心康的延缓衰老作用,为进一步揭示中医病因环境毒邪所致血管衰老机制以及延缓衰老中药的作用,从而为血管衰老的预防和控制提供理论依据。第一部分,镉中毒对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤的影响以及冠心康的防护作用材料和方法:通过人脐静脉内皮细胞体外培养,分成6组,建立正常对照组,1、5、10、30、60μmol/L浓度氯化镉的模型组和西药（硫酸锌）、冠心康（中药复方,分低、中、高剂量）组,继续培养24h、48h、72h后,观察端粒酶活性、SOD和GSH-Px活力及MDA含量变化。结果:1.端粒酶活性:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的端粒酶活性均明显下降。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h的西药组、冠心康低剂量组1-10μmol/L氯化镉,冠心康中、高剂量组1-30μmol/L氯化镉的端粒酶活性增强。（P<0.05）48h的西药组、冠心康高剂量组1-30μmol/L氯化镉,冠心康低、中剂量组1-10μmol/L氯化镉的端粒酶活性增强. （P<0.05）72h的5μmol/L氯化镉的西药、冠心康组的端粒酶活性增强。（P<0.05）2.超氧化物歧化酶（SOD）活力:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的SOD活力均明显降低。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,48h的西药组1-60μmol/L氯化镉、冠心康中剂量组1-30μmol/L氯化镉、冠心康高剂量组1-10μmol/L氯化镉的SOD活力均增高。（P<0.05） 72h的冠心康中剂量组1、5μmol/L氯化镉、冠心康高剂量组1-10μmol/L氯化镉的SOD活力均增高。（P<0.05）3.谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的GSH-Px活力均明显降低。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h、48h、72h的1-60μmol/L氯化镉的GSH-Px活性均增高。4.丙二醛（MDA）含量:与正常对照组比较,24h、48h的模型组和5-60μmol/L氯化镉的西药组、冠心康组MDA含量均增高。（P<0.05）72h除了冠心康中、高剂量组的1-5μmol/L氯化镉以外,其它组MDA含量均增高。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h和48h的西药、冠心康组1-60μmol/L氯化镉的MDA含量均降低。（P<0.05） 72h的1μmol/L氯化镉的冠心康中剂量组、1-10μmol/L氯化镉的冠心康高剂量组MDA含量下降,有显著性差异。（P<0.05）第二部分,镉中毒对人脐静脉内皮细胞细胞凋亡的影响以及冠心康的防护作用材料和方法:主要材料和实验方法与第一部分相同,继续培养24h、48h、72h后,观察Bcl-2含量、BAX蛋白含量、Bcl-2/BAX比值和Caspase-3酶活性变化。结果:1.Bcl-2含量:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的Bcl-2含量明显降低。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h的西药、冠心康组Bcl-2含量均增高。（P<0.05） 48h的西药组、冠心康中、高剂量组1-60μmol/L氯化镉,冠心康低剂量组1μmol/L氯化镉的Bcl-2含量增高。（P<0.05）72h的西药、冠心康中剂量组5-60μmol/L、冠心康高剂量组1-60μmol/L氯化镉的Bcl-2含量增高。（P<0.05）2.BAX蛋白含量:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的BAX蛋白含量增高。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h、48h、72h各组的BAX蛋白含量均降低。（P<0.05）3.Bcl-2/BAX比值:与正常对照组比较,24h、48h、72h各组的Bcl-2/BAX比值下降。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h、72h的西药、冠心康组Bcl-2/BAX比值均增高。（P<0.05） 48h的西药组、冠心康中、高剂量组1-60μmol/L氯化镉和冠心康低剂量组1μmol/L氯化镉的Bcl-2/BAX比值增高。（P<0.05）4.Caspase-3酶活性:与正常对照组比较,除了24h的西药组1μmol/L氯化镉以外,各组的Caspase-3酶活性增强,48h、72h的各组的Caspase-3酶活性均增高。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组相比,24h的西药组、冠心康中、高剂量组的Caspase-3酶活性均明显降低。（P<0.05）48h、72h西药组和冠心康组的Caspase-3酶活性均降低。（P<0.05）第三部分,亚慢性镉中毒大鼠血管内皮细胞的氧化损伤以及冠心康的防护作用材料和方法:选择72只健康Wistar雄性大鼠,随机分为6组,即空白组、模型组、西药组、冠心康低、中、高剂量组,每组12只,每只体重250±50g。除了空白组以外,均给0.05mg/kg镉溶液,连续2周后停镉,同时西药组给2ml硫酸锌溶液,冠心康低、中、高剂量组分别给1.5g/（kg·d）、3g/（kg·d）、6g/（kg·d）的冠心康,连续至60天,造模结束后结果大鼠死亡5只。进行标本制备,取材动物用乌拉坦麻醉后立即取出大鼠的血清、腹主动脉内皮组织,观察端粒酶活性、SOD活力和MDA含量和病理组织学变化。结果:与空白组比较,各组的端粒酶活性和SOD活力明显下降,MDA含量明显增高。（P<0.05）西药、冠心康组与模型组比较,端粒酶活性和SOD活力增高,MDA含量降低。（P<0.05）病理组织学变化结果:模型组的血管内膜明显增厚,管壁可见弥漫性隆起和水肿,部分脱落,内皮下间隙有增宽,平滑肌细胞出现形态改变,排列紊乱,可见泡沫细胞,细胞穿过内弹力膜迁移至内膜;西药组的血管内膜结构形态与正常组相似,平滑肌细胞数量稍多,排列规整,未见泡沫细胞浸润,无水肿和隆起,未见脱落;冠心康低剂量组的血管内膜结构形态与西药组相似;冠心康中剂量组的血管内膜结构形态表现比冠心康低剂量组良好,内皮下间隙较小,细胞连续,未见泡沫细胞浸润,未见隆起、水肿及脱落,未见细胞穿过内弹力膜迁移至内膜;冠心康高剂量组的血管内膜结构形态变化与冠心康中剂量组相似,未见其他异常形态变化。结论:1.镉毒诱导血管内皮细胞的脂质过氧化反应,形成大量的活性氧,使抗氧化物酶能力减弱,从而可能导致血管内皮细胞衰老。2.镉毒性对血管内皮细胞可产生大量的过氧化物,抗氧化物酶能力减弱,从而促进细胞凋亡,导致血管内皮细胞衰老。3.本项研究证明冠心康对镉致衰老的血管内皮细胞具有抗氧化作用及抑制细胞凋亡作用,从而可能延缓血管衰老。4.环境毒邪侵入体内后,机体气血阴阳失调,气机不畅,或损伤脏腑,导致脏腑功能及代谢失常,则会产生痰浊、血瘀等病理产物,加速机体衰老。这是中医病因环境毒邪所致血管衰老的可能机制,从而为血管衰老的预防和控制提供理论依据。
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