全反式维甲酸对食管癌细胞系EC109作用的研究

论文摘要

背景和目的：食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，由于早期诊断率低，既使手术切除，预后仍较差，全世界每年约有30万人死于此疾病。寻找有效的化疗药物成为食管癌治疗领域研究的热点。维甲酸是一大类化合物，包括维生素A及其代谢产物，和具有类似结构或生物活性的天然及人工合成的衍生物。维甲酸可在人体的正常生理活动中发挥重要的功能，如生长、胚胎形成、视觉、免疫等。大量研究证实，维甲酸对多种恶性肿瘤有诱导分化、抑制增殖、诱导凋亡等作用，在皮肤鳞癌、颈癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中已进人临床研究阶段，促进了抗肿瘤治疗的研究。维甲酸类药物调节细胞增殖、分化及凋亡从而达到抑制肿瘤细胞生长的分子机制仍未完全阐明。ATRA是否可能成为治疗食管癌的有效药物?为了回答这一问题，本实验在体外实验中观察ATRA对食管癌细胞系EC109的作用，研究ATRA是否对食管癌细胞系EC109具有增殖抑制作用，并进一步探讨ATRA在体外诱导食管癌细胞凋亡的作用及其作用过程中相关基因表达的变化，为其进一步研究提供实验依据。材料与方法：（1）MTT法测定ATRA对EC109细胞增殖的影响常规培养人食管癌细胞系EC109细胞，将对数生长期的EC109细胞调整细胞浓度为1×104／mL，待培养24h细胞贴壁生长后分为对照组和实验组，对照组加入RPMI-1640培养液，实验组加ATRA至终浓度分别为10μmol／L、5μmol／L、1μmol／L、0.5μmol／L、0.1μmol／L，每一浓度设6个复孔。分别于加药后培养24h、48h、72h、96h检测各组细胞增殖抑制率的差异。（2）流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布常规培养人食管癌细胞系EC109细胞，对照组加入RPMI-1640培养液，实验组加入ATRA使其终浓度为1μmol／L。分别于更换新培养液后24h、48h、72h、96h收集各对照组和实验组的3瓶EC109细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况。（3）RT-PCR法检测凋亡相关基因mRNA水平常规培养人食管癌细胞系EC109细胞，对照组加入RPMI-1640培养液，实验组加入ATRA使其终浓度为1μmol／L。分别于更换新培养液后24h、48h、72h、96h收集各对照组和实验组的3瓶EC109细胞，采用RT-PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达情况。（4）实验数据经SPSS11.0统计软件处理，采用单因素方差分析，以α=0.05为差异显著性标准。结果：（1）ATRA对EC109细胞的抑制作用呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系，实验组与对照组之间及相邻实验组之间的A值和抑制率相比差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）EC109细胞经过1.0μmol／L的ATRA作用后，与对照组相比细胞出现凋亡峰，细胞周期发生明显变化。随药物作用时间的增加凋亡率增高，G0／G1期细胞比例增高，S+G2／M期细胞比例下降，实验组各时间点与对照组的比较和相邻实验组间的比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）EC109细胞经过1.0μmol／L的ATRA作用后，随着药物作用时间的不断增加，bcl-2基因的mRNA水平表现出明显的逐渐减弱趋势，而bax基因的mRNA水平则随着药物作用时间的不断增加表现出明显的逐渐增强趋势，实验组与对照组及相邻实验组间半定量结果差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：1．全反式维甲酸对人食管癌细胞株EC109具有明显的增殖抑制作用。2．全反式维甲酸可以诱导人食管癌细胞株EC109发生凋亡。3．全反式维甲酸诱导人食管癌细胞株EC109凋亡的分子机制可能与下调bcl-2基因转录和上调bax基因转录有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分 全反式维甲酸对食管癌细胞系EC109作用的研究
• 背景和目的
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述部分 维甲酸抗肿瘤的研究进展
• 参考文献
• 英文缩略词索引
• 读硕士期间撰写论文情况
• 致谢