紫草多糖的提取分离与活性研究

论文摘要

天然多糖以其诸多的生物活性及安全性而引起世人的瞩目。它广泛参与细胞识别、细胞生长、分化、代谢、胚胎发育、细胞癌变、病毒感染、免疫应答等各项生命活动,具有增强免疫调节、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、抗病毒、抗凝血、抗溃疡、抗氧化等生物活性。活性多糖分布广泛,主要来源有植物、动物、微生物和海藻等。本文利用提取分离和纯化技术、仪器分析技术、生物大分子研究方法和体外活性测定等手段,以中药紫草为研究对象,研究了紫草多糖的提取、分离技术,并对其免疫活性和肿瘤抑制活性进行了研究,主要结论如下:通过对浸提过程中影响得率的一些因素进行正交实验研究,得出浸提最佳工艺条件为:料液比1:10、提取温度100℃、pH中性、提取两次、每次浸提2h。在醇沉过程中,通过对多糖水溶液浓度和乙醇用量的研究,综合考虑多糖得率和浸膏得率,以及乙醇用量,得出紫草多糖的最佳醇沉工艺条件为:浓缩至1:2、3倍体积乙醇沉淀。通过对几种脱色方法的研究比较,确定脱色最佳方法为使用DEAE-纤维素阴离子交换树脂结合1mol/LNaCl洗脱。对紫草多糖进行分离纯化时,通过对DEAE-纤维素、DEAE-Sephrose FastFlow、S-400等分离效果的比较,确定最佳的分离和洗脱条件为:先用DEAE-Sephrose Fast Flow阴离子交换树脂,在PH7.6的磷酸缓冲液中,0-1mol/L的NaCl梯度洗脱,进行粗分离,然后对各个组分进一步用不同浓度的NaCl梯度进行分离,再用S-400进行纯化。得到APRSⅠ、APRSⅡ-1、APRSⅡ-2、APRSⅢ四个组分。并对紫草多糖的几个组分进行了初步理化性质分析。对各个组分进行免疫调节活性和肿瘤细胞抑制活性测定后发现:APRSⅠ有一定的免疫调节活性;各组分对肿瘤细胞没有明显的细胞毒作用。

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致谢

摘要

ABSTRACT

第一章紫草多糖的提取工艺研究

引言

1.1 材料、试剂与仪器

1.1.1 原料

1.1.2 试剂

1.1.3 仪器和设备

1.2 实验方法

1.2.1 紫草多糖提取工艺流程

1.2.2 多糖含量测定:苯酚-硫酸法

1.2.3 浸膏得率测定

1.2.4 多糖得率测定

1.2.5 正交实验

1.2.6 醇沉工艺研究

1.2.7 脱色方法

1.3 结果与分析

1.3.1 正交实验

1.3.2 醇沉工艺参数对多糖得率和浸膏得率的影响

1.3.3 脱色方法比较

1.4 本章小结

1.5 讨论

References

第二章紫草多糖的分离纯化及理化性质研究

前言

2.1 材料与仪器设备

2.1.1 材料与试剂

2.1.2 仪器与设备

2.2 实验方法

2.2.1 紫草多糖的提取

2.2.2 紫草多糖的脱色

2.2.3 紫草多糖的纯化

2.2.4 紫草多糖理化性质的研究

2.3 结果与分析

2.3.1 紫草多糖的提取

2.3.2 紫草多糖的脱色

2.3.3 紫草多糖的纯化

2.3.4 紫草多糖理化性质的研究

2.4 本章小结

2.5 讨论

References

第三章紫草多糖的结构分析

引言

3.1 实验材料与仪器设备

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验试剂

3.1.3 主要仪器

3.2 试验方法

3.2.1 薄层层析

3.2.2 红外光谱

3.3 结果与讨论

3.3.1 薄层层析

3.3.2 红外光谱

3.4 本章小结

References

第四章紫草多糖的生物活性研究

引言

4.1 材料与仪器设备

4.1.1 试剂与材料

4.1.2 主要仪器

4.2 实验方法

4.2.1 脾淋巴细胞的制备

4.2.2 淋巴细胞增殖实验

4.2.3 肿瘤细胞抑制实验

4.3 实验结果与分析

4.4 讨论

References

第五章总结

第六章文献综述

1 多糖的研究概况

2 多糖的生物活性

2.1 免疫调节活性

2.2 抗肿瘤作用

2.3 多糖的其他药理活性

3 多糖的结构与功能之间的关系

3.1 多糖的一级结构与生物活性的关系

3.2 多糖高级结构与生物活性的关系

3.3 多糖理化性质与生物活性的关系

4 多糖分离纯化的一般方法及原理

4.1 粗多糖的提取

4.2 多糖中杂质的去除

4.3 多糖的分离纯化

4.4 多糖的纯度鉴定

5 多糖的结构分析方法

5.1 活性多糖的一级结构分析

5.2 活性多糖的高级结构分析

6 紫草的研究概况

6.1 紫草的化学成分研究

6.2 药理研究

6.3 提取工艺研究

References

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