论文摘要
油茶是我国特有的木本食用油料树种，本研究以油茶总DNA为材料，进行了SSRs、AFLPs和ISSRs分子标记的研究。采用正交试验和单因素试验，建立并优化了油茶SSR-PCR反应体系，并筛选出8对适合油茶SSR分析的引物组合，结果表明，油茶最适SSR-PCR反应体系为模板DNA（5-10ng/μL）1.0μL，Mg2+（25mmol/L）0.7μL，dNTP （10mmol/L）0.15μL，正反向引物均为（10μmol/L）0.2μL，T aq DNA聚合酶（5U/μL）0.1μL，10×PCR buffer1.0μL，HPLC H2O6.65μL，总体积10.0μL；同时证明了微卫星位点在山茶属（Camellia L.）植物的种间通用性。AFLP反应体系包括酶切和连接体系、预扩增和选择性扩增的建立与优化,并筛选出8对（E-ACT/M-AAC，E-ACG/M-CAA，E-AAG/M-CGA，E-AGT/M-AGT， E-AGG/M-AAG，E-AGG/M-AGT，E-ATC/M-AGT，E-AAT/M-CAA）适合油茶AFLP分析的引物组合，且经重复验证,条带清晰，多态性高。利用ISSR分子标记技术对油茶品种遗传多样和亲缘关系进行了研究，结果表明其遗传多样性较高，遗传多样性参数分别为多态性位点百分率（PPL）99.25%，期望杂合度（He）0.23，遗传多样性指数（I）0.37，普通油茶品种的遗传多样性参数为PPL为96.24%，He为0.23，I为0.37。用UPGMA聚类分析法构建了树形图，表明本研究所用的全部油茶品种明显地分离开来，并且形成安徽、广西和江西三个大组，得到的结果与传统的分类方法相吻合。综上所述，本研究证实了用SSRs、AFLPs和ISSRs分子标记分析油茶品种遗传多样性和亲缘关系的有效性和可行性，将为油茶种质资源鉴定、重要农艺性状的QTL研究以及进一步的遗传学研究提供重要的理论依据和技术支持。
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摘要Abstract1 文献综述1.1 油茶简介1.1.1 油茶的经济价值1.1.2 油茶的生物学特性1.2 分子标记技术1.2.1 SSR1.2.2 AFLP1.2.3 ISSR2 引言2.1 油茶研究现状2.2 研究内容、目的和意义2.2.1 SSR 反应体系的建立及引物筛选2.2.2 AFLP 反应体系的建立及引物筛选2.2.3 基于ISSR分子标记的油茶品种遗传多样性和亲缘关系分析3 材料和方法3.1 试验材料3.2 实验方法3.2.1 油茶基因组 DNA 提取3.2.2 SSR 反应体系的建立及引物筛选3.2.3 AFLP 反应体系的建立及引物筛选3.2.3.1 酶切连接体系的优化3.2.3.2 预扩增反应体系的优化3.2.3.3 选择性扩增反应体系的优化3.2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染3.2.3.5 引物筛选3.2.4 基于 ISSR 分子标记的油茶品种遗传多样性和亲缘关系分析3.2.5 DNA 图谱的判读与数据分析3.2.6 遗传变异的量化3.2.6.1 基本的遗传参数3.2.6.2 遗传变异的度量3.2.6.3 遗传距离的无偏估计4 结果与分析4.1 SSR 反应体系的建立及引物筛选4.1.1 正交试验4.1.2 单因子试验4.1.2.1 模板 DNA 用量对 SSR-PCR 反应的影响4.1.2.2 Mg2 + 用量对 SSR-PCR 反应的影响4.1.2.3 dNTP 用量对 SSR-PCR 反应的影响4.1.2.4 引物用量对 SSR-PCR 反应的影响4.1.2.5 Taq DNA 聚合酶用量对 SSR-PCR 反应的影响4.1.2.6 引物的退火温度对 SSR-PCR 反应的影响4.1.3 引物筛选4.2 AFLP 反应体系的建立及引物筛选4.2.1 AFLP 反应程序与酶切连接体系的优化4.2.2 预扩增反应体系4.2.3 选择性扩增反应体系4.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染4.2.5 引物筛选4.3 基于 ISSR 分子标记的油茶品种遗传多样性和亲缘关系分析4.3.1 ISSR 有效引物的筛选4.3.2 油茶品种 ISSR 遗传多样性分析4.3.3 普通油茶及群体间的遗传变异分析4.3.4 油茶品种亲缘关系分析4.3.5 普通油茶品种群的聚类分析5 结论与讨论5.1 SSR 反应体系的建立及引物筛选5.2 AFLP 反应体系的建立及引物筛选5.3 基于 ISSR 分子标记的油茶品种遗传多样性和亲缘关系分析5.3.1 油茶 ISSR 引物的筛选5.3.2 油茶品种的遗传多样性5.3.3 油茶品种的亲缘关系参考文献附图图版Ⅰ 油茶品种图片图版Ⅱ 油茶 SSR 引物筛选结果图版Ⅲ 油茶 AFLP 引物筛选结果图版Ⅳ ISSR 引物筛选结果附录附录Ⅰ SSR 反应规程附录Ⅱ AFLP 反应规程附录Ⅲ ISSR 反应规程附录Ⅳ 油茶品种遗传多样性参数附录Ⅴ 普通油茶遗传多样性参数附录Ⅵ 中英文缩写与注释附录Ⅶ 试剂的配制致谢个人简历
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标签：油茶论文; 微卫星标记论文; 扩增片段长度多态性论文; 引物筛选论文; 遗传多样性论文; 亲缘关系论文;
