慢病毒载体靶向携带Survivin-siRNA对恶性黑色素瘤A375细胞的影响

论文摘要

[研究背景]黑色素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,具有发病年龄早、转移率高等特点,对各种化疗药物敏感性低。随着现代医学的发展,黑色素瘤的基因治疗成为目前研究的热点。Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis,1AP）家族的新成员,是目前为止发现的最强的凋亡抑制因子。在正常成人组织中不表达,而特异性的表达于人类多种常见肿瘤中,具有抑制凋亡、调节细胞有丝分裂等作用。RNA干扰（RNA interference, RNAi）是利用小的双链RNA（double-stranded RNA, dsRNA）高效、特异地阻断体内目的基因表达,促使mRNA降解,从而达到基因沉默的过程。近年来,被广泛应用于肿瘤基因治疗的研究中。[目的]观察靶向survivin的RNAi对人恶性黑色素瘤A375细胞的影响。[方法]取对数生长期的人恶性黑色素瘤A375细胞,分为空白对照组（不转染）、阴性对照组（转染NC-GFP-LV）、阳性组（转染survivin-RNAi-LV）,利用慢病毒载体进行转染,倒置荧光显微镜下观察转染效果。蛋白质印迹法检测survivin蛋白的表达,实时定量PCR检测survivin-mRNA的表达。[结果]成功设计并构建了survivin-siRNA慢病毒载体,转染72h后观察转染效率达80%以上,与空白对照组相比,转染survivin-siRNA的阳性组,survivin mRNA及蛋白的表达明显降低,抑制率分别为60%、87.38%,差异具有显著性（P<0.05）。与阴性对照组相比,阳性组,survivin mRNA及蛋白的表达明显降低,抑制率分别为59.75%、86.72%,差异具有显著性（P<0.05）。空白对照组与阴性对照组相比,差异不具有显著性（p>0.05）。[结论]靶向survivin的shRNA能够明显抑制恶性黑色素瘤A375细胞的survivin基因的表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文对照
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 学位论文评阅及答辩情况表