论文摘要
一、目的 树突状细胞（DC）是目前已知的功能最强的抗原呈递细胞,它可以在体内、体外向T淋巴细胞呈递抗原,并促进T淋巴细胞增殖和诱发细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。腺相关病毒（AAV）载体常用于治疗遗传性疾病,不仅可以高效的向细胞转染基因,而且在动物试验中可以长期表达目的基因。AFP是由胚胎卵黄囊和胎肝合成,出生后血中AFP水平迅速下降,至成年时几乎难以检测,在2/3的HCC病人的血清中有升高。已有文献报道,AFP在体内能抑制宿主免疫系统,通过对肿瘤坏死因子（TNF）家族及其受体系统的调节,在逃避免疫监视中也发挥作用,间接促进肿瘤的生长;此外,体外实验还证实,AFP直接促进部分肿瘤细胞的生长。本研究旨在探讨表达甲胎蛋白抗原的重组腺相关病毒（rAAV/AFP）转染对人外周血单核细胞（PBMC）来源DC免疫刺激功能的影响,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤治疗的应用提供技术方法。 二、方法 1.DC细胞和T细胞来源于健康志愿者,从外周血经Ficoll密度梯度离心分离获得单核细胞。DC细胞的培养采取已建立的方法并做部分改进:分离当天,将单核细胞悬浮于无血清培养基中,6空板约5×106/孔,24孔板约1×106/孔;在37℃、5%CO2培养箱中温育4h,小心收集非贴壁细胞;贴壁细胞即DC前体细胞以终浓度为1×108个病毒颗粒/ml的rAAV/AFP感染,为