论文摘要
目的:研究增生性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者玻璃体和视网膜前增殖膜（epiretinal membrane,ERM）中心钠素（atrialnatriuretic peptide,ANP）的表达水平,确定ANP参与PDR的形成过程,补充ERM研究的实验方法。方法:第一部分:收集10例PDR患者的ERM为实验组,5例PVR患者的ERM为对照组,用免疫组化染色方法观察两组ERM的增殖特点及ANP在ERM的表达情况,用Mann-Whitney U检验比较实验组和对照组ANP表达率的差异。第二部分:收集30例PDR患者玻璃体为实验组,30例非PDR患者的玻璃体为对照组,用放射免疫分析方法（Radioimmunoassay,RIA）测定玻璃体中ANP的浓度。用Bradford法测定玻璃体中的蛋白浓度。用Mann-Whitney U方法分析两组间ANP浓度、蛋白浓度以及ANP和蛋白浓度比值的差异。第三部分:收集15例PDR患者的ERM为实验组,15例非PDR患者的ERM为对照组,用半定量逆转录聚合酶链反应（reserve transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）测定ERM中ANPmRNA和内参对照3-磷酸甘油脱氢酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,GAPDH）mRNA的表达水平（以ANP和GAPDHmRNA的电泳条带峰值之比表示）,用Mann-Whitney U方法分析两组间比值的差异。结果:第一部分:苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色显示实验组和对照组ERM标本中均可见大量细胞成分,有含色素颗粒的视网膜色素上皮（retinalpigmental epithelium,RPE）细胞、小圆核细胞和椭圆核细胞,此外实验组ERM还含有大量血管成分。免疫组化染色显示:实验组的ERM主要成分为胶质细胞、RPE细胞和血管组织,8例（80%）ERMANP有阳性表达,表达ANP的细胞有胶质细胞、RPE细胞和血管内皮细胞,对照组的ERM主要成分为胶质细胞和RPE细胞,1例（20%）ERM ANP有阳性表达,表达ANP的细胞中有胶质细胞和RPE细胞。实验组和对照组的ANP平均表达率分别为32.1%（范围0～52.0%,中位数33.5%）和1.6%（范围0～8.0%,中位数0%）,两者差异具有统计学意义（P＜0.01）;实验组和对照组GFAP和CK的平均表达率分别为56.4%（范围52.1～60.3%,中位数56.5%）,21.5%（范围18.3～24.6%,中位数23.3%）;58.2%（范围55.1～60.9%,中位数58.4%）和22.7%（范围19.7～25.6%,中位数22.2%）,两者差异无统计学意义（P＞0.05）。第二部分:实验组玻璃体ANP平均浓度为（68.23±16.65）pg/ml（范围40.11～99.56pg/ml,中位数66.30pg/ml）,对照组玻璃体ANP平均浓度为（38.45±7.62）pg/ml（范围30.10～57.32pg/ml,中位数36.86pg/ml）,两组差异具有统计学意义（P＜0.01）;实验组平均蛋白浓度为（810.53±188.60）ug/ml（范围401.33～1361.70ug/ml,中位数786.58ug/ml）;对照组玻璃体平均蛋白浓度为（596.17±161.80）ug/ml（范围375.69～1136.37ug/ml,中位数570.04ug/ml）,两组差异具有统计学意义（P＜0.01）;实验组平均ANP/蛋白值为（0.09±0.02）（范围0.05～0.16,中位数0.09）;对照组ANP/蛋白值为（0.07±0.02）（范围0.04～0.14,中位数0.06）,两组差异具有统计学意义（P＜0.01）。第三部分:实验组ERM ANPmRNA电泳条带平均峰值为188.5±53.6（范围109.3～255.0,中位数213.5）:GAPDHmRNA平均峰值为237.9±31.1（范围162.2～255.0,中位数254.0）,两者平均比值为0.8±0.3（范围0.51～1.4,中位数0.8）;对照组ERMANPmRNA电泳条带平均峰值为100.4±12.0（范围79.2～122.0,中位数98.3）;GAPDmRNA平均峰值为231.6±36.3（范围113.8～255.0,中位数246.8）两者平均比值为0.4±0.1（范围0.31～0.82,中位数0.4）;两组比值差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论:免疫组化研究、半定量RT-PCR技术以及玻璃体浓度测定,都证实了PDR患者ANP的表达水平明显高于非PDR患者,ANP参与PDR的形成过程,其作用可能缘于机体的保护机制。RT-PCR技术应用于ERM研究结果可靠,ERM的研究方法得到补充。
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