论文摘要
目的:1观察小鼠妊娠前和妊娠早期BaP暴露所造成胎盘绒毛组织形态学改变;2研究BaP造成胎盘绒毛组织细胞损伤的作用机制;3研究维生素E是否对BaP的暴露起保护性作用;4为今后的临床研究和孕期保健提供一定的指导。方法:1实验动物的选择:将150只实验动物（ICR小鼠:雌鼠100只、雄鼠50只）随机分为5组,每组30只（雌鼠20只、雄鼠10只）,雌、雄鼠分开饲养。2实验动物的分组对照组:雌鼠每天灌胃BaP（2mg/kg）; 10mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP（2mg/kg）+维生素E（10mg/kg）; 20mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP（2mg/kg）+维生素E（20mg/kg）; 40mg/kg VE对抗组:雌鼠每天灌胃BaP（2mg/kg）+维生素E（40mg/kg）;空白组:雌鼠每天灌胃相同体积的橄榄油。3实验动物的处理将所有的雌鼠灌胃15天后（三个动情周期）,将雌鼠与不作任何处理的雄鼠同笼（每笼2只雌鼠,1只雄鼠）,第2天查看雌鼠阴道外口出现精液栓表示怀孕第1天,雌鼠与雄鼠分开,将已受孕的小鼠继续上述处理7天（早期妊娠7天）,最后一次灌胃后处死小鼠取出胎盘绒毛组织测定相关指标。4测定方法:4.1 RT-PCR法测定胎盘绒毛组织Bax与Bcl-2两目的基因的mRNA水平的表达情况;4.2用GSH-PX与SOD酶活性检测试剂盒检测胎盘绒毛组织的GSH-PX与SOD活性;4.3用HE染色法观察胎盘绒毛组织细胞的形态学改变;4.4免疫组织化学法检测胎盘绒毛组织Bax与Bcl-2两目的基因的蛋白水平表达情况,并在显微镜下观察其蛋白表达的具体位置。4.5使用SPSS10.0软件进行统计学分析结果:1胎盘绒毛组织凋亡相关基因Bax与Bcl-2基因的mRNA水平的表达量:小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织Bax基因的mRNA水平表达量要显著高于空白组（P<0.01）。给予不同浓度的维生素E（10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d）后其Bax基因mRNA水平表达量随着维生素E剂量的加大而减少,但10mg/kg.d对抗组与20mg/kg.d对抗组相比无统计学差异（P=0.183>0.05）,且10mg/kg.d对抗组与对照组无统计学差异（P=0.197>0.05）。Bcl-2基因的mRNA水平表达量要显著低于空白组（P<0.01）,给予不同浓度的维生素E（10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d）后其Bcl-2基因的mRNA水平表达量随着维生素E剂量的加大而减少（P<0.05）。两基因的mRNA水平表达量比值随着维生素E剂量的加大而逐渐降低（P<0.01）,显著低于对照组（P<0.05）。Bax与Bcl-2基因的mRNA水平表达量上存在一定的负相关关系（r=-0.951,P=0.002<0.01）。2胎盘绒毛组织细胞GSH-PX与SOD活性的改变:小鼠给予2mg/kg.d后胎盘绒毛组织细胞的GSH-PX与SOD活性均降低,显著低于空白组（P<0.01）。给予不同浓度的维生素E（10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d）后,GSH-PX与SOD的活性均较BaP（2mg/kg.d）组升高（P<0.05）,随着维生素E剂量的加大两酶的活性均逐渐升高（P<0.05）,但20mg/kg.d对抗组和40mg/kg.d对抗组GSH-PX活性无统计学差异（P=0.205>0.05）。3胎盘绒毛组织细胞的形态学改变:通过HE染色法在400倍镜下观察胎盘绒毛组织细胞形态学变化,发现小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织细胞呈现细胞凋亡的典型特征:核膜皱缩,核固缩,核碎裂,且数量较空白组明显增多,给予不同浓度的维生素E（10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d）后其凋亡细胞的数量减少,且随着剂量的加大其数量逐渐减少。4胎盘绒毛组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2基因的蛋白水平的表达量:小鼠给予2mg/kg.d后,胎盘绒毛组织Bax基因的蛋白水平表达量要显著高于空白组（P<0.01）。Bcl-2基因的蛋白水平的表达量显著低于空白组（P<0.01）。给予不同浓度的维生素E（10mg/kg.d、20mg/kg.d、40mg/kg.d）后Bax基因的蛋白水平表达量逐渐减少（P<0.05）且随着维生素E剂量的加大而表达量逐渐减少（P<0.05）,而Bcl-2基因的蛋白水平表达量逐渐升高（P<0.05）且随着维生素E剂量的加大而表达量逐渐升高（P<0.05）。两基因蛋白水平表达量比值随着维生素剂量的加大而逐渐降低（P<0.01）,显著高于对照组（P<0.01）。Bax与Bcl-2基因的蛋白水平表达量之间存在一定的相关关系（r=-0.825,P= 0.021<0.05）。Bax基因的蛋白水平表达量与mRNA水平表达量上存在一定的相关关系（r=0.789,P=0.025<0.05）,Bcl-2基因的蛋白水平表达量与其mRNA水平的表达量之间存在一定相关关系（r=0.972,P=0.018<0.05）。结论:1已证实小鼠孕前（15天）和孕早期7天BaP（2mg/kg.d）的暴露能促进胎盘绒毛组织细胞发生凋亡;2首次证实在胎盘绒毛组织中BaP能通过升高Bax基因mRNA水平和蛋白水平的表达量,降低Bcl-2基因mRNA水平和蛋白水平的表达量而促进细胞发生凋亡;3首次证实在胎盘绒毛组织中BaP通过降低GSH-PX与SOD酶活性而促进细胞发生凋亡;4维生素E能通过调节Bax、Bcl-2基因的mRNA水平和蛋白水平的表达量,升高GSH-PX与SOD的活性,从而抑制BaP所导致的胚胎绒毛组织细胞凋亡。
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