论文摘要
前言早产儿发生新生儿呼吸窘迫综合征（neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）将严重威胁新生儿生命，其主要原因是新生儿肺发育不成熟，Ⅱ型肺泡上皮细胞不能合成足够的肺表面活性物质（pulmonary surfactant，PS）。地塞米松（dexamethasone，DEX）被广泛应用于临床，能够有效促进Ⅱ型肺泡上皮细胞合成、分泌肺表面活性物质，诱导胎肺成熟，但其孕周依赖性以及抑制胎儿生长和加重母胎感染等副作用已越来越多地引起关注。盐酸氨溴索（ambroxol，ABX）作为一种快速促排痰药，除了能促进呼吸道粘稠分泌物排出外，近年来大量研究表明还可促进表面活性物质的合成和分泌，增加卵磷脂／鞘磷脂比值，也有明显的促胎肺成熟作用，且与地塞米松相比无明显不良反应。本实验拟联合应用盐酸氨溴索与地塞米松作用体外培养的人胎肺Ⅱ型上皮细胞，并与单一应用盐酸氨溴索或地塞米松组相比较，确定盐酸氨溴索与地塞米松在体外促胎肺成熟方面是否具有协同作用。材料与方法1、材料来源选择2006年4月至2006年12月期间，于中国医科大学附属盛京医院产科病房行腔内引产的死亡胎儿12例。患者及家属同意死亡胎儿尸体由医院处理。孕28～34周，胎儿性别不限，取胎儿双侧肺组织为实验对象。2、主要试剂Percoll、15％FCS-RPMI1640、地塞米松、盐酸氨溴索等。3、实验方法收集的胎肺组织经解剖分离和0.25％胰蛋白酶—EDTA消化后，采用密度梯度离心法对Ⅱ型肺泡上皮细胞进行分离和纯化，在15％FCS-RPMI1640培养液、37℃的条件下，培养至细胞长成单层。倒置显微镜下观察细胞的生长状态，并在透射电子显微镜下鉴定Ⅱ型肺泡上皮细胞。对培养成功的Ⅱ型肺泡上皮细胞分别施加ABX、DEX和ABX+DEX，并继续培养48小时，用Bartlett法和改良Lowry法分别测定用药后的Ⅱ型肺泡上皮细胞中饱和磷脂和总蛋白的含量，以饱和磷脂／总蛋白比值作为数据结果。所得到的数据结果用均数±标准差（（?）±S）表示，采用SPSS13.0统计学软件进行处理与分析，t检验比较总体均数的差异，检验水准取α=0.05。实验结果1、Ⅱ型肺泡上皮细胞培养结果倒置显微镜下Ⅱ型肺泡上皮细胞贴壁生长，贴壁时间为16.24±0.37h。呈现上皮细胞的典型形态，多边形或梭形，细胞核明显，胞浆较丰富。在培养35.38±0.41h之后，细胞相互连接成单层。2、Ⅱ型肺泡上皮细胞的电镜鉴定结果透射电镜下Ⅱ型肺泡上皮细胞表面有短小的微绒毛，胞质内含有电子密度较大的分泌颗粒，形状和大小不一，呈板层状结构，即典型的板层小体。培养的细胞中Ⅱ型肺泡上皮细胞百分比为72.365±0.354％。3、ABX、DEX及ABX+DEX对Ⅱ型肺泡上皮细胞中饱和磷脂／总蛋白含量比值的影响（1）未用药组饱和磷脂／总蛋白含量比值为1.99±0.375μmol／mg，ABX、DEX及ABX+DEX三组饱和磷脂／总蛋白比值分别为2.78±0.34gmol／mg、2.95±0.49μmol／mg和3.46±0.46μmol／mg。（2）ABX、DEX及ABX+DEX三组分别与未用药组相比，P值分别为0.0079、0.0096及0.014，均有显著性差异；ABX+DEX组与ABX组相比，P值为0.0069，有显著性差异；ABX+DEX组与DEX组相比，P值为0.015，有显著性差异；单一应用ABX组与DEX组相比，P值为0.320，无显著性差异。4、ABX、DEX及ABX+DEX对不同孕周胎儿肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂／总蛋白含量比值的影响（1）未用药组中孕28+0～30+6周和孕31+0～33+6周中饱和磷脂／总蛋白含量比值分别为1.78±0.31μmol／mg和2.20±0.32μmol／mg；ABX组中分别为2.74±0.32μmol／mg和2.82±0.39μmol／mg；DEX组中分别为2.69±0.41μmol／mg和3.01±0.48μmol／mg；ABX+DEX组中分别为3.32±0.36μmol／mg和3.6±0.53μmol／mg。（2）将未用药组中孕28+0～30+6周和孕31+0～33+6周标本中饱和磷脂／总蛋白含量比值均数进行比较，P值为0.045，有显著性差异；ABX组中的均数进行比较，P值为0.483，无显著性差异；DEX组中的均数进行比较，P值为0044，有显著性差异；ABX+DEX组中的均数进行比较，P值为0.312，无显著性差异。结论1、ABX和DEX两种药物均能增加未成熟胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量；联合应用的效果要优于单一应用；单一应用ABX或DEX对胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量的影响无显著差异。2、孕周较大的胎肺组织中Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量高于孕周较小者。ABX和ABX+DEX均对促进小孕周的胎肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞饱和磷脂的含量增加的作用更为明显。