论文摘要
目的：利用HLA—DQ8转基因小鼠建立实验性自身免疫性眼肌型重症肌无力（oEAMG）模型，并探讨oEAMG免疫学发病机制。方法：HLA—DQ8转基因小鼠18只，随机平均分成对照组和实验组，实验组小鼠分别用乳化于完全弗氏佐剂的E.coli质粒表达重组人乙酰胆碱受体（H-AChR）γ亚单位20μg于0天免疫，乳化于不完全弗氏佐剂的重组H-AChRγ亚单位于30天和60天强化免疫，对照组用PBS代替H-AChRγ亚单位进行初次和强化免疫，眼部症状根据单眼或双眼的上睑下垂程度评估，全身肌力改变使用握力器评估，第二次免疫后第15天和45天收集小鼠血清，放射免疫分析法（RIA）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中抗AChR抗体水平，并用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组小鼠眼外肌中AChRα、γ和ε亚单位mRNA表达变化。结果：（1）实验组小鼠单眼或双眼均出现不同程度的上睑下垂症状，眼部症状评分明显高于对照组（P＜0.001），实验组oEAMG发病率为89％，明显高于对照组（P＜0.001）；（2）第二次免疫后第6周开始，实验组小鼠肌肉握力明显降低，差异有显著性（第6、7周P值分别等于0.009、0.0191）；（3）第二次免疫后第15、45天，RIA结果显示实验组血清中抗—AchR抗体水平均明显高于对照组（P均＜0.01），ELISA结果显示实验组血清中抗—AchR抗体（IgM、IgG、Ig2b、Ig2c、IgG1）水平均明显高于对照组（P均＜0.01）；（4）与对照组相比，RT-PCR结果显示实验组AChRα、γ和ε亚单位mRNA表达明显增强（P值均＜0.01）。结论：重组H-AChR亚单位免疫后能诱发HLADQ8转基因小鼠发生oEAMG。抗—AChR抗体在oEAMG发病机理中起重要作用，参与oEAMG的发生与发展。重组H-AChRγ亚单位的免疫原性诱导的自身免疫应答破坏眼外肌AChR，启动AChR基因转录的上调机制，免疫后小鼠眼外肌（EMOs）AChRα、γ和ε亚单位基因转录增加。该oEAMG模型可能成为研究人类眼肌型重症肌无力（oMG）和全身型重症肌无力（gMG）发病机制和临床疗效评价的有效手段。