论文摘要
大肠杆菌是医学和兽医临床上最常见的一种病原菌，其致病性株可引起仔猪黄痢、白痢、猪水肿等病。随着兽医临床上抗菌药物的广泛应用，大肠杆菌耐药菌株开始不断出现，甚至出现多重耐药菌株。本论文主要进行了猪源大肠杆菌临床分离菌株的鉴定、目的菌株的部分耐药基因检测及AcrA基因的原核表达这三方面进行研究，结果如下：1)从湖南省各地采集99株病原菌株，通过形态及理化特征鉴定，确认其中27株为大肠杆菌菌株。用临床常用的32种抗生素对27株大肠杆菌进行药敏试验，结果表明，Z16株对所用抗生素均不敏感，Z01、Z08、Z12、Z27、Z34株仅对多粘菌素B敏感。2)对Z16、Z01、Z08、Z12、Z27、Z34株采用ERIC—PCR方法进行分型鉴定，通过比较电泳带型得知，六个菌株具有不同的谱型。依据Z16株的耐药谱，检测了头孢类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素耐药的相关基因；克隆与序列分析表明，菌株含有头孢类Ampc酶基因型中的ACT基因型、氨基糖苷类的aph（3’）—Ⅱ基因和喹诺酮类的gyrA和parC基因；通过序列比对，发现gyrA和parC基因在质粒和染色体上都有1—2个的碱基突变。提示，这些耐药基因的存在及其碱基的变化与Z16株的耐药水平有一定的相关性。3)根据GenBank中发表的AcrA基因全长序列设计一对特异性引物进行扩增，获得一个大小为696bp的DNA片段，再将其克隆到表达载体pET28a+中，并转化至宿主菌BL21（DE3）中获得了高效表达。药敏试验结果表明，重组菌株失去对喹诺酮类药物的抗药性。