小鼠胚胎冷冻和重复冷冻的研究

论文摘要

本实验主要应用程序冷冻和玻璃化冷冻两种方法对小鼠桑椹胚和囊胚进行冷冻,探讨不同浓度的乙二醇(EG)和EFS玻璃化液对胚胎发育的影响,并研究胚胎经重复冷冻的可行性及解冻后的发育率。实验结果表明:1.经抗冻保护剂的玻璃化与脱玻璃化试验,EFS20、EFS30和EFS40可以做为小鼠胚胎玻璃化冷冻液。2.经抗冻保护剂的毒性试验表明,作为抗冻保护液基础液的mPBS对胚胎体外发育无不良影响;低浓度的乙二醇(1.8mol/L~3.6mol/L)对胚胎几乎无毒性,但高浓度的乙二醇(4.5mol/L)对胚胎有一定的毒性;在EFS20、EFS30和EFS40中短时间处理(0.5min)对胚胎几乎无毒性,但随着浓度的增加和处理时间的延长,毒性也越来越大。3.经不同浓度的乙二醇程序化冷冻和不同浓度的EFS系列玻璃化冷冻,桑椹胚冷冻解冻后的发育率分别为52.8%~92.5%和78.9%~91.5% ,囊胚分别为38.6%~82.8%和72.5%~81.3%。其中以1.8mol/LEG和EFS30对小鼠的胚胎冷冻效果最好(桑椹胚的发育率分别为92.5%和91.5%,囊胚的发育率分别为82.8%和81.3%)。4.程序化冷冻和玻璃化冷冻两种冷冻方法差异不显著。5.桑椹胚的抗冻性优于囊胚。6.经1.8mol/LEG首次程序化冷冻后再经1.8mol/LEG程序化冷冻和EFS30玻璃化冷冻的发育率,桑椹胚分别为46.7%和53.8%,囊胚分别为26.4%和33.9%;经EFS30首次玻璃化冷冻后再经1.8mol/LEG程序化冷冻和EFS30玻璃化冷冻的发育率,桑椹胚分别为39.4%和41.3%,囊胚分别为29.1%和31.0%。小鼠胚胎经重复冷冻是可行的;重复冷冻还可以做为检验胚胎耐冻性、冷冻方法和冷冻保护剂的一种手段。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 哺乳动物胚胎冷冻保存技术研究进展
• 1.1.1 胚胎冷冻的概念
• 1.1.2 胚胎冷冻的目的和意义
• 1.1.3 冷冻保存的基本原理
• 1.1.4 关于低温保存方法的研究
• 1.1.5 关于冷冻保护剂的研究
• 1.1.6 关于解冻方法的研究
• 1.1.7 低温保存的热力学研究
• 1.1.8 影响胚胎冷冻保存效果的因素
• 1.1.9 冷冻胚胎解冻后的活力鉴定
• 1.2 小鼠胚胎冷冻的研究进展
• 1.2.1 冷冻原理
• 1.2.2 冷冻的方法
• 1.2.3 解冻的方法
• 1.2.4 冷冻进展
• 第二章 抗冻保护剂的玻璃化与脱玻璃化试验
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 抗冻保护剂溶液的配制
• 2.1.2 玻璃化溶液的配制
• 2.1.3 玻璃化试验
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 抗冻保护剂的毒性试验
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 小鼠的超排和胚胎的获取
• 3.1.3 主要仪器、设备
• 3.1.4 主要试剂、药品
• 3.1.5 溶液的配制
• 3.1.6 毒性试验
• 3.1.7 胚胎正常发育能力的判定
• 3.1.8 统计分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 对照组试验结果
• 3.2.2 EG 组试验结果
• 3.2.3 EFS 组试验结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 小鼠胚胎程序化冷冻和玻璃化冷冻的试验
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 小鼠的超排和胚胎的获取
• 4.1.3 所用的试剂和仪器设备
• 4.1.4 冷冻液和解冻液
• 4.1.5 胚胎的冷冻
• 4.1.6 解冻
• 4.1.7 胚胎的发育性判定
• 4.1.8 结果统计分析
• 4.2 结果
• 4.2.1 不同浓度的乙二醇程序冷冻试验结果
• 4.2.2 不同浓度的EFS 玻璃化冷冻试验结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第五章 小鼠胚胎的重复冷冻试验
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 实验动物
• 5.1.2 小鼠的超排和胚胎的获取
• 5.1.3 所用的试剂和仪器设备
• 5.1.4 胚胎的重复冷冻
• 5.2 结果
• 5.2.1 乙二醇首次冷冻后用不同方法作重复冷冻的试验结果
• 5.2.2 EFS30 首次冷冻后用不同方法作重复冷冻的试验结果
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 个人简介