益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达IGF-I、TGF-β1mRNA的影响

论文摘要

目的 观察益骨胶囊含药血清对成骨细胞-破骨细胞共育体系中成骨细胞表达IGF-I和TGF-β1 mRNA的影响,在细胞分子水平上以阐明益骨胶囊防治骨质疏松症可能的作用机制。 方法 （1）运用琼脂糖凝胶和孔径为0.45μm微孔滤膜建立平面式成骨细胞-破骨细胞共育体系。 （2）将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组（高、中、低剂量）和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清。 （3）取第三代OB以2×104个/孔的密度接种OB培养室,将新分离的破骨细胞以2×104个/孔接种于破骨细胞培养室,分别加入不同浓度含药血清和空白灭活血清,5天后用MTT法测定OB增殖,确定含药血清的最佳剂量和浓度。 （4）运用ELISA法检测益骨胶囊含药血清在48h、72h、96h对成骨细胞-破骨细胞共育体系中成骨细胞表达IGF-I的量的影响。 （5）运用FQ-PCR法检测益骨胶囊含药血清对成骨细胞-破骨细胞共育体系中OB生长因子TGF-β1 mRNA表达的影响。 结果 （1）蛋白质弥散实验,经考马斯亮蓝法检测,结果显示,在8小时内,蛋白质可以OB培养室经过隔膜弥散到OC培养室,表明平面式共育体系的建立是成功的。 （2）益骨胶囊含药血清对OB的增殖呈现一定的量效关系,其中高剂量组25%和30%浓度对共育体系中OB的增殖有较明显的促进作用,与其它各剂量组比较有显着差异（P<0.01）。 （3）益骨胶囊含药血清共育组在在48h、72h、96h成骨细胞·破骨细胞共育体系中表达IGF-I的量明显高于空白血清共育组,且呈时效关系,在统计学

论文目录

• 主要简略语中英文对照表
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1. 现代医学对骨质疏松症的研究
• 1.1 OP的流行病学及危害性
• 1.2 OP的分类与诊断
• 1.3 病因及发病机制
• 1.4 OP的防治现状
• 1.5 现代医学对骨质疏松症的研究进展
• 2. 中医学对OP的认识及研究进展
• 2.1 中医学关于OP的早期记载及命名
• 2.2 中医学的“肾主骨”学说的形成和内容
• 2.3 病因病机
• 2.4 辨证论治
• 2.5 中药防治骨质疏松作用机理研究
• 3. 中药血清药理学研究方法
• 3.1 中药血清药理学对多系统的实验研究
• 3.2 中药血清药理学对病原体的实验的研究
• 3.3 对中药血清体外药理实验意义的论证
• 3.4 对中药血清药理的药动学及药物化学研究
• 4. 益骨胶囊防治骨质疏松的研究概述
• 4.1 益骨胶囊方解
• 4.2 益骨胶囊既往的临床研究
• 4.3 益骨胶囊既往的实验研究
• 5. 本研究的思路和目的
• 实验一 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达IGF-I的影响
• 1. 实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要设备和器材
• 1.3 实验动物
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配置方法
• 2.2 成骨细胞的分离与鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离与鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞平面式共育体系的建立
• 2.5 含药血清的制备
• 2.6 ELISA法检测IGF-I的含量
• 2.7 统计学处理
• 3. 实验结果
• 3.1 成骨细胞鉴定
• 3.2 破骨细胞鉴定
• 3.3 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 3.4 各剂量组含药血清不同添加浓度对OB增殖的量效曲线
• 3.5 益骨胶囊对共育体系中成骨细胞ICF-I的表达
• 4. 讨论
• 4.1 平面式成骨-破骨细胞共育体系建立的意义
• 4.2 中药血清药理学方法应用意义
• 4.3 IGF-I与骨质疏松的关系
• 5. 实验小结
• 1mRNA影响'>实验二 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达TGF-β₁mRNA影响
• 1. 实验材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要实验仪器及设备
• 1.3 实验动物
• 1.4 实验药物
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配置方法
• 2.2 成骨细胞的分离与鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离与鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 2.5 含药血清的制备
• 1的影响'>2.6 FQ-PCR法检测益骨胶囊对共育体系中成骨细胞分泌TGF-β₁的影响
• 3. 实验结果
• 3.1 解链曲线结果
• 3.2 测定的荧光定量阳性标准品梯度扩增曲线
• 3.3 测定的荧光定量阳性标准曲线分析
• 1mRNA的影响'>3.4 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞分泌TGF-β₁mRNA的影响
• 4. 讨论
• 5. 实验小结
• 结语
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 致谢