马缨杜鹃种子萌发与组织培养技术体系研究

论文摘要

本研究以马缨杜鹃（Rhododendron delavayi Franch）为试验材料,从种子萌发和组织培养两方面探索马缨杜鹃繁殖的有效途径。种子萌发采用不同浸种方式和贮藏条件对种子发芽率的影响,从而筛选出适宜马缨杜鹃种子的浸种方式和贮藏条件;组织培养以马缨杜鹃茎尖、茎段及无菌苗的茎尖、茎段、叶片、根为外植体,着重研究培养需要的最适培养基类型和培养程序,以及培养过程中防止污染和减轻褐变的措施,建立起马缨杜鹃组织培养和快速繁殖技术体系。马缨杜鹃种子萌发及组织培养体系各环节的研究结果如下:（1）0.5%硼酸溶液、室温蒸馏水、30℃蒸馏水浸种24h均能提高马缨杜鹃种子发芽率,但以0.5%硼酸溶液浸种效果最好,种子发芽率和发芽势分别为71.08%和22.9%,同时,在相同浸种处理下,以马雄山居群的种子发芽率和发芽势最高;对马缨杜鹃种子进行短期贮藏时,室温贮藏条件是较适合的方法,长期贮藏时,冷藏贮藏条件是较适合的方法。（2）种子无菌发芽的最适培养基为:1/4MS + KT 1.0mg/L +水解酪蛋白300mg/L,其中蔗糖25g/L,卡拉胶5g/L,45天后发芽率为73.33%。（3）细胞分裂素的筛选:1.0mg/L的6-BA和KT能促进外植体的顶芽伸长和腋芽萌发,但未见增殖,而且在试验中未发现6-BA对马缨杜鹃有毒害作用;0.2mg/L的TDZ虽然不能促进马缨杜鹃茎段腋芽的萌发,但能够使其它外植体直接诱导出丛生芽和形成较多愈伤组织。（4）外植体选取:以幼嫩无菌苗为接种材料时,带芽茎段作为外植体的成活率和增殖率高;而以野生马缨杜鹃植株为外植体时,枝条中部及下部腋芽作为外植体,对减轻污染有较好的效果,外植体采集最佳时间为3月下旬至4月上旬,切取茎尖时,较大的组织效果较好。（5）外植体消毒:马缨杜鹃种子萌发的小苗,采用0.1%升汞+吐温23滴溶液消毒15min;野生马缨杜鹃茎尖,先用70%酒精表面消毒20s,再用0.1%升汞+吐温23滴溶液深层消毒10min;野生马缨杜鹃茎段,先用70%酒精表面消毒30s,再用0.1%升汞+吐温23滴溶液深层消毒15min。（6）继代增殖:WPM + TDZ 0.8mg/L + IBA 0.2mg/L + KT 0.0mg/L为诱导丛生芽增殖的最佳培养基配比,60天时丛生芽平均增殖倍数可达6.22。（7）适合无菌苗茎尖及茎段丛生芽诱导的培养基配方组合为:WPM + TDZ0.8mg/L + IBA 0.2mg/L + KT 0.0mg/L,60天时丛生芽平均增殖倍数可达6.51。（8）适合无菌苗叶片愈伤组织诱导的培养基配方组合为:WPM + TDZ 0.1mg/L + IBA 0.2mg/L + NAA 0.2mg/L,60天后,诱导率为62.22%;适合诱导无菌苗叶片愈伤组织出芽的培养基配方组合为:WPM + TDZ 0.2mg/L + IBA 0.4mg/L + NAA 0.0mg/L,60天后,出芽率为70.59%,平均芽个数为7.25个。（9）适合丛生芽伸长培养的培养基配方组合为:WPM + KT 0.5mg/L + GA3 2.0mg/L + AC 0.1%,45天后,芽平均生长量为3.3cm。（10）适合丛生芽芽苗壮苗培养的培养基配方组合为:WPM培养基。（11）适合马缨杜鹃组织培养苗生根的培养基配方组合为:1/2WPM + NAA 0.5mg/L + IBA 2.0mg/L + AC 0.2% +蔗糖10g/L,90天后,生根率为100%,平均根数为16.6条,平均根长为2.92cm。（12）炼苗移栽基质以腐质土:园土:珍珠岩=1:1:1效果最好,移栽存活率可达82%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 2 国内外研究现状及发展趋势
• 2.1 杜鹃种子繁殖研究进展
• 2.2 国内外杜鹃组织培养研究进展
• 2.2.1 外植体种类
• 2.2.2 培养基类型
• 2.2.3 培养条件
• 2.2.4 生长调节物质
• 2.2.5 杜鹃组织培养存在的问题及发展趋势
• 2.3 国内外马缨杜鹃研究进展
• 2.4 本研究的目的和意义
• 3 试验材料与方法
• 3.1 种子萌发
• 3.1.1 不同浸种方式对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 3.1.2 不同贮藏温度对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 3.2 组织培养
• 3.2.1 试验材料
• 3.2.2 技术路线
• 3.2.3 试验方案
• 3.2.3.1 无菌发芽
• 3.2.3.2 细胞分裂素的筛选
• 3.2.3.3 外植体消毒处理
• 3.2.3.4 继代增殖培养设计方案
• 3.2.3.5 利用无菌苗不同部位进行试验
• 3.2.3.6 丛生芽伸长培养设计方案
• 3.2.3.7 壮苗培养
• 3.2.3.8 生根培养
• 3.2.3.9 炼苗移栽
• 3.3 试验结果评价指标
• 3.4 数据的收集
• 3.4.1 种子萌发
• 3.4.2 外植体消毒效果
• 3.4.3 启动培养与继代培养效果
• 3.4.4 壮苗与生根培养效果
• 3.4.5 无菌苗叶片和根愈伤组织诱导及分化效果
• 3.5 数据统计分析方法
• 4 试验结果及分析
• 4.1 种子萌发
• 4.1.1 不同浸种方式对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 4.1.1.1 不同浸种方式对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 4.1.1.2 不同浸种方式对马缨杜鹃种子发芽势的影响
• 4.1.1.3 不同居群间马缨杜鹃种子发芽率的差异
• 4.1.1.4 不同居群间马缨杜鹃种子发芽势的差异
• 4.1.1.5 种子千粒重与发芽率的相关性分析
• 4.1.2 不同贮藏温度对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 4.1.2.1 不同贮藏温度下贮藏1 个月对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 4.1.2.2 不同贮藏温度下贮藏10 个月对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 4.2.2.3 不同贮藏温度下贮藏1 个月对马缨杜鹃种子发芽势的影响
• 4.1.2.4 不同贮藏温度下贮藏10 个月对马缨杜鹃种子发芽势的影响
• 4.2 组织培养
• 4.2.1 无菌发芽
• 4.2.2 细胞分裂素的筛选
• 4.2.3 外植体消毒处理
• 4.2.3.1 取材季节对培养效果的影响
• 4.2.3.2 酒精消毒时间
• 4.2.3.3 5%次氯酸钠溶液＋吐温2～3 滴的消毒时间
• 4.2.3.4 0.1%升汞＋吐温2～3 滴的消毒时间
• 4.2.4 继代增殖培养
• 4.2.5 利用无菌苗不同部位进行试验
• 4.2.5.1 无菌苗茎尖茎段培养
• 4.2.5.2 无菌苗叶片愈伤组织诱导
• 4.2.5.3 无菌苗根愈伤组织诱导
• 4.2.6 丛生芽伸长培养
• 4.2.7 壮苗培养
• 4.2.8 生根培养
• 4.2.9 炼苗移栽
• 5 讨论
• 5.1 种子萌发
• 5.1.1 不同浸种方式对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 5.1.2 不同贮藏温度对马缨杜鹃种子发芽率的影响
• 5.2 组织培养
• 5.2.1 污染控制
• 5.2.2 外植体褐变的防治
• 5.2.3 基本培养基的选择
• 5.2.4 TDZ 在杜鹃培养中的运用
• 5.2.5 愈伤组织诱导再分化
• 5.2.6 植株黄化的防治
• 6 主要结论
• 参考文献
• 在读期间发表论文
• 致谢
• 附录