论文摘要
目的通过观察早期糖尿病视网膜病变(DR)大鼠玻璃体腔注射Bevacizumab后血视网膜屏障(BRB)功能、视网膜血管形态的变化,研究玻璃体腔注射Bevacizumab应用于早期DR后延缓DR进展的有效性,明确Bevacizumab的剂量及合适重复给药时间,探讨预防性使用的可行性。方法1糖尿病(DM)大鼠模型制造：正常清洁级雄性SD大鼠80只,随即抽取13只作为正常对照组(N组),余67只尾静脉注射链脲佐菌素(STZ) 45 mg/kg诱导糖尿病(DM)大鼠模型。于给药后一周剪尾采血测空腹血糖,若血糖水平>16.65 mmol／L,表明DM大鼠模型建立成功。模型建立后观察1周,然后开始计算DM病程。观察各组大鼠的形态改变,每4周检测1次空腹血糖及体质量。2 DM大鼠患有早期DR验证：成模后10周,抽取DM大鼠及正常大鼠各2只进行视网膜铺片,比较观察正常大鼠和DM大鼠微血管形态变化,确定DM大鼠已患有早期DR。3玻璃体腔注射Bevacizumab:在确定DM大鼠已患有DR后,DM大鼠随机分为糖尿病对照组(DR组)、大剂量治疗组(H组)及小剂量治疗组(L组),L组及H组分别给予浓度为1.25mg/ml及2.5mg/ml的Bevacizumab4μ1玻璃体腔注射,均注射一次,N组及DR组未接受任何治疗。4治疗效果观察：干预治疗后2周、4周及8周,进行免疫组织化学检测分析血.管内皮生长因子(VEGF)表达的变化,用伊文思蓝(EB)法定量检测BRB破坏程度,用EB灌注视网膜铺片法观察视网膜血管形态的变化,研究玻璃体腔注射Bevacizumab延缓DR进展的作用。采用SPSS17.0软件包进行统计学处理,采用单因素方差分析分析数据,P值<0.05认为差异有统计学意义。结果1 DM大鼠模型制造：实验组大鼠一次成模65只,未成模的大鼠用于正常对照组,成模率为97%。2 DM大鼠患有早期DR验证：成模后10周,视网膜铺片示：正常大鼠视网膜血管走行大致正常,血管密度均匀,毛细血管管径粗细一致,未见迂曲扩张及微血管瘤等病理变化,未见染料渗漏；DM大鼠视网膜血管变密,血管走行迂曲,可见静脉串珠样改变,偶见小血.管渗漏染料。DM大鼠已发生早期视网膜病变。3本实验中共50只DM大鼠接受玻璃体腔注射Bevacizumab治疗,其中2只由于技术操作问题,出现玻璃体积血,至实验结束,未发现眼内炎的患鼠,玻璃体腔注射Bevacizumab的大鼠随着注射时间的延长,均出现白内障。4治疗效果：干预治疗后,免疫组化显示：各组大鼠视网膜内VEGF各层均有表达,干预治疗组VEGF表达强于N组而弱于DR组。干预治疗后2周,N组、DR组、L组及H组EB渗漏量差异有统计学意义(P=0.000),L组及H组之间差异无统计学意义(P=0.364)；干预治疗后4周,N组、DR组、L组及H组EB渗漏量差异有统计学意义(P=0.000),L组及H组之间差异有统计学意义(P=0.035)；干预治疗后8周,N组、DR组、L组及H组EB渗漏量差异有统计学意义(P=0.000),L组及H组之间差异有统计学意义(P=0.031)。视网膜铺片示：DR组：给药后2周,视网膜血管明显变密,血管走行明显迂曲,可见视网膜大血管分支渗漏染料,可见微血管瘤,未见新生血管；给药后4周及8周,视网膜血管迂曲扩张,管径粗细不均,某些部位管腔狭窄甚至闭塞,走行紊乱,周边视网膜小血管大片染料渗漏,可见微血管瘤、无灌注区。各干预组视网膜血管的密度较N组明显增高,较DR组明显减轻.视网膜血管迂曲不明显,未见染料渗漏,未见微血管瘤及无灌注区。L组偶见小血管渗漏。结论(1)检测DR大鼠视网膜内EB含量,可以比较精确地发现大鼠视网膜BRB的改变,是评价DR大鼠BRB功能的有效方法。(2)给予早期DR大鼠玻璃体腔注射Bevacizumab可以部分修复受损的BRB,延缓视网膜微血管病变的进展,在不引起视网膜毒性损伤的情况下,玻璃体腔注入适量的Bevacizumab有延缓DR进展的作用,2.5mg/0.1ml的远期效果可能优于1.25mg/0.1ml。(3)玻璃体腔注射Bevacizumab修复DR大鼠BRB/及延缓视网膜微血管病变进展的作用与剂量有关,且注射后至少8周内效果稳定,本实验认为Bevacizumab重复给药的时间可以延长至给药后8周。
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