论文摘要
研究背景:慢性乙型肝炎是严重危害人类身体健康、影响人类期望寿命和生存质量的疾病,是目前我国及众多国家的重要疾病负担之一。因此,深入探讨慢性乙型肝炎的发病机理,对慢性乙型肝炎的防治与诊治具有重要的意义。慢性乙型肝炎是受遗传与环境因素共同作用的多因子疾病,基因在该病的发病中具有重要的作用。有研究表明,基因-环境交互作用在慢性乙型肝炎的发病中具有重要影响。近年来随着人类基因组计划的迅速发展和分子生物学技术的应用,从基因水平阐明慢性乙型肝炎的发病机制成为医学界关注的热点。诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）通过合成一氧化氮（nitric oxide,NO）在肝脏中具有重要作用近年来颇受关注。转基因动物实验研究表明,iNOS基因敲除的Hepatitis B virus（HBV）转基因小鼠HBV复制水平明显高于正常的HBV转基因小鼠;病毒性肝炎中iNOS的表达量远远高于其他肝病组,表明iNOS可能与HBV感染有关。iNOS的调节主要在转录水平。其转录受细胞因子、脂多糖及其他炎症介质诱导。iNOS基因突变可能会影响iNOS的产生、功能及活性,从而影响疾病的发生。资料显示,iNOS基因G-954C变异者单核细胞的iNOS活性具有7倍以上升高,并且该突变对机体罹患疟疾具有保护作用。然而关于iNOS基因G-954C变异与慢性乙型肝炎之间的关系,以及该变异与环境因素之间交互作用对慢性乙型肝炎患病的影响如何,目前国内外罕见报道。研究目的:1.探讨iNOS基因G-954C变异与慢性乙型肝炎之间的关系。2.探讨iNOS基因G-954C变异与环境因素之间在慢性乙型肝炎发病中的交互作用。研究方法:采用以医院为基础的病例-对照研究设计。选择济南市某医院确诊的237例汉族慢性乙肝患者做病例组,238名汉族正常人为对照组。用PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测iNOS基因G-954C变异;运用t检验比较计量资料各组之间的均数差异;运用x2检验分析计数资料在各组之间的频数分布差异;运用单因素及多因素Logistic回归分析iNOS基因G-954C变异与慢性乙型肝炎之间的关系。iNOS基因G-954C变异与环境因素之间交互作用采用单纯病例研究,并用Logistic回归分析予以分析。主要研究结果:1.iNOS基因G-954C变异基因型频率（GG、GC、CC）慢性乙型肝炎组（78.9%、19.0%、2.1%）与对照组（86.6%、12.6%、0.8%）比较差异无统计学意义（p=0.074）,但GC+CC基因型频率慢性乙型肝炎组（21.1%）显著高于对照组（13.4%）（p=0.027）。C等位基因频率慢性乙型肝炎组（11.6%）也显著高于对照组（7.1%）（p=0.018）。用多元非条件Logistic回归调整性别、年龄、吸烟、饮酒后,突变基因型仍对慢性乙型肝炎具有显著影响（p=0.047,OR=1.565,95%CI:1.005-2.438）。2.iNOS基因G-954C变异与HBV-DNA载量显著相关（p=0.014）。低水平HBV-DNA载量在突变基因型患者中占7.6%,而在GG基因型患者中为25.0%,表明该基因变异在一定程度上升高HBV-DNA的复制水平。3.iNOS基因G-954C变异与谷丙转氨酶（alanine amino transferases,ALT）无显著相关（p=0.126）。ALT升高者在突变基因型患者中占70.0%,而在GG基因型的患者中80.1%。用多元非条件Logistic回归调整性别、年龄、吸烟、饮酒后,在突变基因型与GG基因型之间ALT水平仍无显著性差异（p=0.144）。4.iNOS基因G-954C变异与谷草转氨酶（aspartate amino transferases,AST）无显著相关（p=0.205）。AST升高者在突变基因型患者中占80.0%,而在GG基因型患者中为87.1%。用多元非条件Logistic回归调整性别、年龄、吸烟、饮酒等后,在突变基因型与GG基因型之间AST水平仍无显著性差异（p=0.331）。5.iNOS基因G-954C变异与病情严重程度显著相关（p=0.026）,突变基因型患者中,慢性乙型重度肝炎、肝硬化和肝癌的比例（58.0%）显著高于GG基因型组（34.8%）。6.并发症的发生率在突变基因型患者（24.0%）与GG基因型患者（13.9%）之间差异无统计学意义（p=0.084）。用多元非条件Logistic回归调整性别、年龄、吸烟、饮酒后,该变异与并发症的发生仍无显著性相关（p=0.136）。7.iNOS基因G-954C变异与饮酒之间在慢性乙型肝炎的发病中存在一定的交互作用,但交互作用无统计学意义。未调整混杂因素时,两者之间的交互作用为OR=1.679（p=0.134）;用多元非条件Logistic回归调整年龄、性别、吸烟、疾病分期等混杂因素后,两者之间的交互作用为OR=1.738（p=0.178）。8.iNOS基因G-954C变异与吸烟之间在慢性乙型肝炎的发病中无显著的交互作用。未调整混杂因素时,两者之间的交互作用为OR=1.232（p=0.592）;用多元非条件Logistic回归调整年龄、性别、饮酒、疾病分期等混杂因素后,两者之间的交互作用为OR=1.104,（p=0.827）。结论:1.iNOS基因G-954C变异可能是中国汉族慢性乙型肝炎发病的重要危险因素之一。2.iNOS基因G-954C变异与HBV-DNA载量显著相关。具有该基因变异者HBV-DNA复制水平显著升高。3.iNOS基因G-954C变异与ALT水平、AST水平及并发症的发生无显著相关。4.iNOS基因G-954C变异与病情严重程度显著相关,突变基因型发生慢性乙型重度肝炎、肝硬化和肝癌的可能性显著升高。5.iNOS基因G-954C变异与饮酒之间在慢性乙型肝炎的发病中存在一定的交互作用,虽然此交互作用无显著性,这主要是由于本研究样本较小之故。6.iNOS基因G-954C变异与吸烟之间在慢性乙型肝炎的发病中无显著的交互作用。