论文摘要
不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin,LT）是产肠毒素性大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）产生的一种对热敏感的毒素,是引起旅游者腹泻的主要原因之一。LT由一个具有ADP-核糖基化转移酶活性的A亚基和具有GM1-神经节苷脂受体结合位点的同源五聚体B亚基组成,是迄今发现的作用最强,研究最深入的免疫原之一,同时也具有很强的粘膜佐剂作用,但其高毒性阻碍它直接用于人类疫苗。因此,改建LT降低其毒性,研制新的无毒又保持其高效粘膜免疫活性的衍生物成为各国研究的热门课题。 现有的研究结果表明,已构建的LT衍生物中,无毒突变体（LTK63）及重组无毒B亚单位（rLTB）很有可能成为大有潜力的能够用于人体的粘膜免疫佐剂,但LT的免疫机制以及LTB免疫佐剂作用的普遍性仍存在很多争议。 本研究应用PCR的方法获得我国人源ETEC标准菌株E44815的elt基因和eltB基因,又通过重叠延伸定点诱变的方法将LTA亚基63位丝氨酸密码子突变为编码赖氨酸的密码子,构建突变体mLT63的基因。将获得的三个基因片段分别重组于原核表达载体,构建了LT、突变体mLT63、无毒亚单位LTB三个蛋白的原核表达系统;通过Western blot方法鉴定三种蛋白的表达及免疫反应活性。以期构建无毒又保持LT免疫活性的粘膜佐剂候选株,并进一步研究LT的免疫机理及其在基因工程疫苗研制上的应用。 实验方法 1.E44815 elt基因及eltB基因的克隆与序列分析
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