顺铂、SN-38对宫颈癌细胞增殖及凋亡的实验研究

论文摘要

课题一SN38抑制Akt途径诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究目的：体外研究SN-38对宫颈癌细胞系HeLa和SiHa的细胞毒性及诱导其凋亡的机制。方法采用MTT法测定SN-38对Hela和SiHa细胞增殖的影响；流式细胞仪和Hochest33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况；Western Blot测定p53、p21、Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白水平的表达。结论SN-38抑制Hela和SiHA细胞生长呈时效和量效关系；经0.4μg／ml SN-38分别在12、24、36、48小时作用Hela和SiHa细胞，亚G1峰与对照组有显著性差异；Western Blot提示SN-38作用Hela和SiHa细胞后p53和p21蛋白水平表达逐步升高p-Akt蛋白水平表达逐渐降低，Bax、Bcl-2和Akt的表达无变化。转染全长Akt1可减少SN-38对HeLa和SiHa细胞的细胞毒性。结果SN-38是通过p53介导的凋亡途径及通过抑制Akt生存途径杀伤肿瘤细胞的。课题二顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究目的研究顺铂在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法采用MTT法测定顺铂对Hela细胞增殖的影响；流式细胞仪和Hochest33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况；RT-PCR测定检测HPV E6的mRNA水平表达；Western Blot测定HPV E6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表达。结果顺铂抑制Hela细胞生长呈时效和量效关系；经10μg／ml顺铂分别在12、24、36、48小时作用Hela细胞，亚G1峰与对照组有显著性差异；RT-PCR提示顺铂作用Hela细胞后HPV E6的mRNA水平表达逐渐降低；Western Blot提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低，p53、p21和Bax蛋白水平表达逐步升高，Bcl-2的表达无变化。结论顺铂随着药物浓度和时间的增加对Hela细胞的体外抑制效应增加。顺铂通过抑制HPVE6的表达，恢复p53的功能，引起细胞凋亡，起到杀伤肿瘤的目的。课题三顺铂诱导宫颈癌Siha细胞周期阻滞及凋亡的研究目的探讨顺铂在体外对宫颈癌Siha细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法测定顺铂对Siha细胞增殖的影响；DNA ladder和Hoechst33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况；流式细胞仪检测药物作用前后的周期阻滞和凋亡。Western Blot检测E6、p53和p21的表达。结果顺铂抑制Siha细胞生长呈时效和量效关系；经10μM顺铂分别在12、24、36、48小时作用Siha细胞，亚G1峰分别与对照组有显著性差异；顺铂能使Siha细胞发生G2-M期阻滞，24小时达到最高，凋亡开始。Hoechst33258实验组可见凋亡细胞；琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。Western Blot提示顺铂作用Siha细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低，p53和p21蛋白水平表达逐步升高。结论顺铂随着药物浓度和时间的增加对Siha细胞的体外抑制效应增加。顺铂通过引起Siha细胞G2-M周期阻滞及抑制HPVE6蛋白的表达，恢复p53功能，启动凋亡，起到杀伤肿瘤作用。

论文目录

• 缩略语表
• 正文
• 课题一SN38抑制Akt途径诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究
• 1.中文摘要
• 2.英文摘要
• 3.前言
• 4.材料和方法
• 5.结果
• 6.讨论
• 7.参考文献
• 课题二 顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究
• 1.中文摘要
• 2.英文摘要
• 3.前言
• 4.材料和方法
• 5.结果
• 6.讨论
• 7.参考文献
• 课题三 顺铂诱导宫颈癌Siha细胞周期阻滞及凋亡的研究
• 1.中文摘要
• 2.英文摘要
• 3.前言
• 4.材料和方法
• 5.结果
• 6.讨论
• 7.参考文献
• 综述
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 攻读博士期间发表的文章
• 致谢