论文题目: 重组非糖基化尿激酶型纤溶酶原激活剂的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 心血管内科
作者: 杨波
导师: 李天德,胡显文
关键词: 突变体,非糖基化,抗凝血酶
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的 构建非糖基化、抗凝血酶激活的高分子量尿激酶原突变体。 方法 使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg156)突变为赖氨酸(Lys156),去掉凝血酶作用位点。 结果 PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子量为1296Da(道尔顿,dalton)。突变体与pUC19克隆载体用HindⅢ、XbaⅠ双酶切。二者连接后,转化入DH5α感受态细胞(大肠杆菌)中。用蓝白斑筛选法识别PCR产物是否与pUC19载体连接。包含PCR产物的克隆呈现白色。将白色克隆提质粒送测序。测序正确的基因与pIPES双表达载体连接后备用。 结论 非糖基化抗凝血酶的高分子量尿激酶原突变体构建成功。
论文目录:
英文缩略词表
前言
实验一、非糖基化高分子量尿激酶原的研究
第一部分、高分子量尿激酶原突变体基因的构建
第二部分、突变体基因在CHO细胞的表达与鉴定
第三部分、蛋白质产物的纯化与鉴定
第四部分、蛋白质产物性质的研究
小结
实验二、非糖基化低分子量尿激酶原的研究
摘要
第一部分、低分子量尿激酶原突变体基因的构建
第二部分、突变体基因在CHO细胞的表达与鉴定
第三部分、蛋白质产物的纯化与鉴定
第四部分、蛋白质产物性质的研究
讨论
总结及展望
参考文献
综述
致谢
附录
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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