国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖影响的机制研究

论文摘要

目的:探讨国产雷帕霉素（宜欣可）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞的体外抗增殖作用及对细胞周期的影响,并探讨其分子机制。方法:常规体外培养人淋巴瘤细胞株Raji细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay, MTT）法检测国产雷帕霉素不同浓度组（0、1、5、10、20、40、50、100nmol/ml）、不同时间组（24、48、72h）细胞存活和生长的情况,从而选择适当的药物浓度及作用时间点进行进一步的检测。根据上述MTT结果,筛选不同浓度的实验组（5、10、20、40、50、100nmol/ml ）分别与阳性对照组比较;筛选不同时间（24、48h）的实验组与12小时实验组（MTT试验抑制增殖不明显）及各自相应的阳性对照组比较,并用流式细胞仪（flow cytometry,FCM）测定各组国产雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响,然后提取经国产雷帕霉素50nmol/ml作用不同时间（0、12、24、48、72h）的细胞总蛋白,考马斯亮蓝标准曲线法（Bradford法）定量,以β-actin作为内参照,应用western blot方法检测不同组别周期蛋白cyclinD1、cyclinE、cyclinA、p27及凋亡蛋白抑制因子survivin蛋白的表达水平。结果:1 MTT结果:国产雷帕霉素对Raji细胞具有抑制增殖的作用。不同浓度国产雷帕霉素（1、5、10、20、40、50、100nmol/ml）处理细胞24、48、72小时后,与对照组相比各处理组吸光度值（OD）均有不同程度的下降,经SPSS统计软件处理数据后显示,国产雷帕霉素处理24小时后药物浓度为1nmol/ml和5nmol/ml的处理组与相应对照组比较无统计学意义;药物处理48小时和72小时后浓度为1nmol/ml的处理组与相应的对照组比较也无统计学意义,其余各不同浓度、不同时间点的药物处理组与相应的对照组之间具有显著性差异（P<0.05）。且随着国产雷帕霉素处理浓度的增大、作用时间的延长、OD值逐渐下降,即国产雷帕霉素对Raji细胞的增殖抑制作用有明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。2细胞周期和细胞凋亡检测:流式细胞仪检测国产雷帕霉素处理后的Raji细胞周期分布和凋亡情况显示,不同浓度不同时间点国产雷帕霉素处理后的Raji细胞均未见到明显的亚二倍体凋亡峰。但随着药物浓度的加大、药物作用时间的延长,处于G0/G1期的细胞逐渐增多,而处于S期和G2/M期的细胞则逐渐减少。即国产雷帕霉素处理后的Raji细胞没有明显的凋亡,而细胞周期进程阻滞于G0/G1期,且该作用呈明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系。3 Western blot检测结果:国产雷帕霉素50nmol/L处理后cyclinD1、cyclinE、p27的表达没有明显变化。在国产雷帕霉素处理后不能检测到cyclinA和survivin蛋白的表达。结论:1国产雷帕霉素（宜欣可）通过阻滞Raji细胞周期于G0/G1期而抑制Raji细胞的生长、增殖,其机制与下调cyclinA和survivin的表达有关。2宜欣可对淋巴瘤可能具有治疗价值。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 国产雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji 细胞增殖细胞增殖影响的机制研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附表
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 mTOR 信号途径和恶性肿瘤
• 致谢
• 个人简历