论文摘要
磷脂酶D是普遍存在于细菌、真菌、植物及动物中的一类磷脂水解酶,可以水解磷脂分子内特定的酯键从而生成磷脂酸PA和自由的头部基团分子。在植物中,PLD及其产物PA参与了逆境胁迫、激素响应、囊泡运输、细胞骨架蛋白重组等多个细胞过程。为了在植物中研究磷脂酶D的生理功能,我们在拟南芥中分离得到了AtPLDζ2的全长cDNA克隆,并对其生理功能进行了初步研究。不同组织的RT-PCR以及对启动子区域驱动的GUS转基因植株进行染色分析,揭示了AtPLDζ2在多个组织中特异表达,并且该基因可以被生长素诱导表达。AtPLDζ2的缺失突变体atpldζ2、及缺失表达的转基因植株具有主根变短的表型,同时还降低了对外源生长素的敏感性、以及生长素调节的重力向性响应和高温下生长素促进的下胚轴伸长。AtPLDζ2的过量表达的转基因植株具有与atpldζ2及AtPLDζ2缺失表达的转基因植株完全相反的表型。PLD特异抑制剂1-butanol处理或AtPLDζ2的缺失表达可以降低生长素介导的DR5-GUS在根尖的分布以及早期生长素响应基因对生长素的响应。1-butanol处理植株还可以导致根部伸长区表皮细胞的膨大和生长素介导的DR5-GUS异常分布,并抑制生长素诱导的DR5-GUS在主根的伸长区大量积累以及生长素促进的侧根形成。外源添加PA或AtPLDζ2的过量表达可以促进DR5-GUS在根部维管束的积累以及生长素早期响应基因对生长素的响应,进一步阐明了AtPLDζ2及其产物PA在植物对生长素的响应过程中起到正向的调控作用。通过囊泡特异的荧光染料FM4-64对植株染色证明AtPLDζ2及其产物PA在植物细胞内影响了囊泡运输。进一步的实验证明,AtPLDζ2及其产物PA通过影响囊泡运输进而影响了生长素输出蛋白PIN1和PIN2在细胞质膜与细胞质之间的快速循环,从而介导了植物对生长素的响应过程。