AG490对人未成熟树突状细胞诱导初始性CD4+T细胞分化为Treg细胞影响的体外研究

论文摘要

目的:利用人外周血获得未成熟树突状细胞,通过AG490对人未成熟树突状细胞诱导CD4+T细胞分化为CD4+ CD25+T细胞转化率影响的体外研究,确定JAK-STAT信号传导通路其对CD4+T细胞转化为调节性T细胞的影响,研究人imDC诱导移植免疫耐受机制。方法:抽取一个健康成人肘静脉血50ml,用梯度密度离心法从血液标本中分离单个核细胞（PBMC）,在37℃、5 %CO2的条件下,10%FCS RPMI-1640完全培养液培养,加入GM-CSF（100ng/ml）和IL-4（50ng/ml）诱导,每3d半量换液1次,培养7天后收集疏松贴壁细胞。未成熟树突状细胞的鉴定:1)在光镜下和倒置相差显微镜下进行形态学观察,2)利用流式细胞术检测细胞的表面分子标志,3)细胞功能测定。免疫磁珠分选法从另一个体脐血中分离CD4+T细胞,均分为5组细胞:（1）空白组: CD4+T细胞加入等容量RPMI-1640单独培养;（2）混合对照组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养,不加其他试剂,诱导Treg;（3）低浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为10μg/mL AG490;（4）中浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为30μg/mL AG490;（5）高浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为50μg/mL AG490。再进行混合培养5天,以流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞转化率。结果:（1）imDC的鉴定:在形态学方面,培养至第7天的单个核细胞悬浮生长,表面可见毛刺状突起,体积较前增大。（2）FCM检测Treg细胞的转化率:imDC与CD4+混合培养后, F??攧reg细胞的转化率,结果如下:空白组的Treg细胞转化率为1.74±0.18%,混合对照组的Treg细胞转化率为22.23±0.77%,而低浓度AG490组为22.31±0.82%,中浓度AG490组为41.39±1.87%,高浓度AG490组为42.32±1.18%。低浓度AG490组与混合对照组之间无显著性差异（P值>0.05）,中浓度AG490组和高浓度AG490组之间也无显著性差异（P值>0.05）,其余各组之间两两比较均有显著性差异（P值<0.05）。结语:（1）人外周血来源的imDC可以诱导CD4+T细胞转化成Treg细胞。（2）JAK2/3信号通路特异性阻断剂AG490可以部分促进CD4+T

论文目录

• 一、主要缩略语中英文索引（English Abbreviations Induces）
• 二、中文摘要（Chinese Abstract）
• 三、英文摘要（English Abstract）
• 四、正文
• 第一章（Chapter 1 ） 前言（Introduction）
• 第二章（Chapter 2 ） 材料和方法（Materials and Methods）
• 第三章（Chapter 3 ） 结果（Results）
• 第四章（Chapter 4 ） 讨论（Discussion）
• 第五章（Chapter 5 ） 结语（Conclusions）
• 五、参考文献（References）
• 六、综述（Review）
• 七、读研期间发表的论文（Theses）
• 八、致谢（Acknowledgements）