萍乡红鲫转铁蛋白研究

萍乡红鲫转铁蛋白研究

论文摘要

萍乡红鲫(Pingxiang red-transparent crucian carp,Carassius auratus var.Pingxiangnesis)是江西省萍乡的一种野生鲫鱼突变种。经过七年的工作,已经完成了对其6代的选育。选育后的萍乡红鲫具有生长速度快、适应性强、营养价值高、易养易繁、抗病力强等优良经济性状,2008年被全国水产原、良种审定委员会审定为新品种。实验以萍乡红鲫的血清转铁蛋白(TF)为对象,通过电泳研究该鱼TF的表型、分子量等遗传性质;通过同源克隆得到该鱼TF-cDNA的序列,以期了解其遗传背景,为进一步的科学研究提供资料。本文的工作主要为:一、对萍乡红鲫的血清转铁蛋白(Transferrin,简称TF)进行电泳分析。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)发现随机选取的12尾萍乡红鲫TF表型完全的相同,个体间没有差异;萍乡红鲫的TF表型为两个条带,推测可能由一个座位上的二个等位基因遗传决定。采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对TF进行分析得出其分子量大约为71KDa。经人工选育的萍乡红鲫TF表型一致,种群内未见多样性,认为其遗传性状趋于稳定纯系;萍乡红鲫不同个体间完全致的TF表型及分子量,可以利用TF雌核发育鉴定的遗传标记揭示萍乡红鲫具有雌核发育的生殖方式。二、为进一步了解了萍乡红鲫TF的分子机制,利用RT-PCR和RACE-PCR克隆出萍乡红鲫TF互补基因,克隆得到的TF-cDNA包含完整的开放阅读框(open reading frame,ORF),肉红鲫TF-cDNA长2364碱基对(base pair,bp),包括8bp的5′非编码区(untranslated region,UTR),355bp的3’UTR,编码666个氨基酸,理论信号肽切割位点位于15-16个氨基酸之间,预测的分子量为71.9,没有潜在的糖基化位点,还有34个半胱氨酸残基。结果分析表明萍乡红鲫TF遗传性质与彩鲫A、银鲫E同源性较高。最后对萍乡红鲫TF蛋白序列进行二级结构理论分析和三级结构的同源建模。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略语表
  • 目录
  • 第1章 文献综述
  • 1.3 本研究的目的和意义
  • 第2章 萍乡红鲫转铁蛋白电泳研究
  • 2.1 引言
  • 2.2 材料和方法
  • 2.2.1 主要实验仪器
  • 2.2.2 化学药品
  • 2.2.3 实验材料
  • 2.2.4 样品的制备
  • 2.2.5 电泳
  • 2.3 实验结果
  • 2.4 讨论
  • 第3章 萍乡红鲫转铁蛋白互补cDNA的克隆与分析
  • 3.1 引言
  • 3.2 材料与方法
  • 3.2.1 主要实验仪器
  • 3.2.2 化学药品及试剂盒
  • 3.2.3 质粒和菌株
  • 3.2.4 相关软件
  • 3.2.5 肝脏总RNA的提取
  • 3.2.6 RT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)和RACE-PCR(rapid amplification of cDNA end)扩增萍乡红鲫TF-cDNA
  • 3.2.7 PCR产物的克隆和序列分析
  • 3.2.8 蛋白质二级结构预测和同源建模
  • 3.3 实验结果
  • 3.3.1 萍乡红鲫TF-cDNA克隆
  • 3.3.2 萍乡红鲫TF-cDNA序列
  • 3.3.3 萍乡红鲫TF-cDNA序列与其他脊椎动物TF序列的比较
  • 3.3.4 萍乡红鲫TF序列与鲫鱼TF序列的比较
  • 3.3.5 萍乡红鲫TF二级结构预测、SWISS-MODEL同源建模
  • 3.4 讨论
  • 3.4.1 萍乡红鲫的同源性与系统进化分析
  • 3.4.2 萍乡红鲫TF蛋白的结构分析
  • 小结
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 相关论文文献

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