含植物性雌激素中药对去卵巢大鼠局灶性脑缺血损伤防治作用的实验研究

论文摘要

目的:在建立去卵巢大鼠模型的基础上,通过动物实验,探讨含植物性雌激素中药对脑缺血损伤的防治作用。方法:健康雌性Wistar大鼠72只,体重200-250g,随机分为3组,即正常组、去卵巢组（简称去势组）、去卵巢加中药组（简称实验组）各24只。经适应性饲养3天后,将去势组和实验组大鼠实施卵巢切除术,正常组大鼠实施伪手术,只切除等量脂肪。术后10天,隔日进行阴道涂片,观察脱落细胞,以了解去势是否完全。在确认去势成功后,三组大鼠继续给予饲料喂养,实验组在给予饲料喂养的基础上同时给予含有雌激素的中药复方（黄芪30g、三七粉3g（冲）、银杏叶6g、蒲黄15g（包煎））灌胃,1次/天。正常组和去势组给予等量蒸馏水灌胃。自给药开始2周后,对所有大鼠进行局灶性缺血模型的制作。所有动物在手术前6小时禁食,以防高血糖对缺血性脑损害的影响,参照文献,采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血模型,大鼠腹腔内注射10%水合氯醛（350mg/kg体重）麻醉后,仰卧固定,颈部正中切口,分离并暴露右侧颈总及颈内、颈外动脉,并在颈内外动脉分叉处结扎颈外动脉,右侧颈总动脉剪口,插入头端烧成圆钝形直径为0.25mm的尼龙鱼线,进长度约18～19mm,在大脑中动脉起始端堵塞大脑中动脉,然后将颈总动脉连同尼龙鱼线一起结扎,缝合皮肤,放回笼内,单笼喂养。选择苏醒后左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者进行实验,否则视为栓堵失败,弃之不用。手术过程中监测大鼠直肠温度,并用电热毯保持在36.5～37.5℃。于造模成功24小时后,处死各组大鼠,取以海马为中心约10×8×5m3的大脑组织,10%的甲醛固定,乙醇逐级脱水,石蜡包埋,切片机切片,HE染色和尼氏染色,光镜观察并摄像。断头取血,3500r/min离心10min,提取上清待测,检测各组大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素8（IL-8）、白介素6（IL-6）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）含量。用放射免疫法检测TNF-α、IL-8、IL-6含量。采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定MMP-9含量。在429nm测MMP-9的OD值,MMP-9浓度与OD值成正比,用酶标仪测得OD值间接反映其含量的变化。结果:1含植物性雌激素中药对去卵巢大鼠局灶性缺血病理组织学的影响正常组:海马CA1区锥体细胞排列较乱,细胞脱失较多,细胞水肿较明显。海马CA3区锥体细胞脱失,细胞核固缩较多,细胞水肿较明显。去势组:大鼠海马CA1区和CA3区锥体细胞排列稀疏、紊乱,细胞体积缩小,胞核固缩,胞浆浓缩、深染,细胞水肿明显。实验组:海马CA1区锥体细胞排列较整齐,细胞脱失少,有少数细胞核固缩为三角形或多角形,细胞水肿不明显。海马CA3区锥体细胞脱失,部分细胞核固缩,细胞水肿不明显。2含植物性雌激素中药对去卵巢大鼠局灶性脑缺血后血清中TNF-α、IL-8、IL-6含量的影响2.1与正常组比较,去势组大鼠血清中TNF-α含量增高（P<0.05）,与去势组比较,实验组血清中TNF-α含量下降（P<0.05）。2.2与正常组比较,去势组大鼠血清中IL-8含量增高（P<0.01）,与去势组比较,实验组血清中IL-8含量降低（P<0.01）。2.3与正常组比较,去势组大鼠血清中IL-6含量增高（P<0.05）,与去势组比较,实验组血清中IL-6含量降低（P<0.05）。3含植物性雌激素中药对局灶性缺血大鼠血清中MMP-9含量的影响与正常组比较,去势组大鼠血清中MMP-9增加（P<0.05）,与去势组比较,实验组血清中MMP-9含量下降（P<0.05）。结论:1含植物性雌激素中药可减轻脑缺血对海马组织形态学损伤。2含植物性雌激素中药可降低局灶性脑缺血去势组大鼠血清中TNF-α、IL-8、IL-6炎性介质的含量以及MMP-9的数量。减轻脑缺血炎性损伤,维护血脑屏障的完整性改善脑水肿,减轻神经细胞的坏死,达到防治脑缺血损伤的作用。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文 含植物性雌激素中药对去卵巢大鼠局灶性脑缺血损伤防治作用的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附表
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 植物雌激素对脑缺血的保护作用研究概况
• 致谢
• 个人简历