RNA干扰抑制结肠癌livin的表达及对细胞增殖的影响

论文摘要

目的:应用RNA干扰技术抑制Livin在结肠癌细胞中的表达,观察Livin受抑制后细胞增殖情况的变化,为RNA干扰技术的临床应用奠定基础。方法:将Livin基因作为RNA干扰的靶区,根据GeneBank数据库提供的Livin基因的两种异构体的共同核苷酸序列,设计合成shRNA寡核苷酸序列,并与质粒载体pGeneSil-1定向连接,将连接产物转化到感受态细胞DH5а,提取质粒并进行酶切鉴定和测序。将构建成功的质粒载体转染HT-29结肠癌细胞中,倒置荧光显微镜下观察细胞表达强化绿色荧光蛋白的情况。Western-blot检测Livin蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测细胞周期。结果:成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体.它们不同程度地抑制了HT-29细胞Livin基因的表达,以si-Livin2抑制效率最高,它对Livin的蛋白抑制率达67.15%。si-Livin2转染48 h后,与未转染组相比,细胞增殖活力受到抑制,转染48 h抑制率达28.6%。细胞周期重新分布,G0/G1期上升为（64.70±2.60）%,S期下降为（28.77±2.70）%。结论:针对Livin基因的shRNA表达载体能明显抑制Livin基因的表达,Livin靶向RNA干扰有效地抑制HT-29细胞增殖。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• RNA 干扰抑制结肠癌Livin 的表达及对细胞增殖的影响
• 前言
• 第一部分 抗livin 蛋白shRNA 表达载体的构建及鉴定
• 前言
• 1 材料
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 第二部分 RNA 干扰抑制结肠癌细胞Livin 的表达及对细胞增殖的影响
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 附图
• 全文总结
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表文章情况