化学发光在药物及生物分析中的应用研究

化学发光在药物及生物分析中的应用研究

论文摘要

化学发光分析法具有仪器设备简单、易于实现自动化等显著优点,成功应用于化学及生物分析领域,与其他技术的联用进一步促进了化学发光技术的快速发展,拓展了其应用领域。本文首先将化学发光技术应用于传统药物分析中,针对只溶于酸性介质的药物建立了碱性条件下测定的新方法。在以上工作的基础上,将化学发光技术与纳米技术相结合,建立了超灵敏的免疫分析方法,构建了几种新型化学发光传感器。本论文的具体内容包括以下几部分:1、本章对化学发光分析法及其在药物分析中的应用,以及化学发光分析法与纳米技术联用的现状进行了综述。首先介绍了化学发光分析法的发展、概念、原理以及基本装置;详细介绍了化学发光分析法的原理及在药物分析中的应用;综述了纳米材料在化学发光分析领域中的应用。在以上基础上,提出和开展了本论文的主要研究内容。2、甲氧氯普胺只能溶于酸性介质中,使得碱性条件下用流动注射对其进行化学发光定量检测存在一定的困难。本文在酸性介质和高温条件下,以K2Cr207为氧化剂氧化甲氧氯普胺(metoclopramide, MCPM),而K2Cr207被还原为Cr(Ⅲ),利用Cr(Ⅲ)对luminol-H202体系的发光增强作用,结合流动注射技术,建立了在碱性条件下测定MCPM的化学发光新方法。结果表明,该方法对MCPM测定的线性范围为1.0×10-8-1.5×10-5g/mL,检出限为8.0×10-9g/mL,对8.0×10-6g/mL的MCPM连续8次测定的相对标准偏差为2.9%。该方法灵敏度较高、操作简便,可成功应用于药片中MCPM含量的测定,为只溶于酸性介质的MCPM等药物在碱性条件下进行化学发光检测奠定了良好的基础。3、本章采用Fe304纳米材料固定一抗,Au NPs@C纳米复合材料固定二抗和辣根过氧化物酶,并采用夹心免疫模式,以双螺旋管和盘管为反应器和分离器,实现了对人体免疫球蛋白IgG的超灵敏快速定量检测。Au NPs优良的生物相容性为Au NPs@C纳米复合材料有效地保持蛋白质的活性奠定了基础;同时,Au NPs@C纳米复合材料的大比表面积为二抗及酶的高密度负载提供了良好平台,使化学发光信号大大增强,提高了对目标分子检测的灵敏度。此外,利用Fe304纳米粒子的磁性质实现了分析检测过程的自动化,以螺旋管为反应器有效促进了免疫反应的快速进行,并且盘管分离器的使用实现了磁性纳米粒子夹心免疫结合物与未结合二抗复合物的完全分离。本方法对人体免疫球蛋白IgG免疫分析检测在10 min内即可完成,检测的线性范围为1.0-1000 ng/mL,检测限为0.74 ng/mL。该分析方法快速、实用,可以广泛用于其他蛋白质和DNA的检测。4、提出一种制备石墨烯/鲁米诺纳米复合物的新方法,用壳聚糖将该复合物固定在玻璃管中,构建了一种新型的化学发光传感器。本文中考察了常温混合、高温混合、常温加EDC/NHS混合三种不同的石墨烯/鲁米诺纳米复合物制备方法对传感器性能的影响,结果表明,常温下通过EDC/NHS将鲁米诺和石墨烯交联的方法制备的纳米复合物对鲁米诺分子的固载量最大,对H202的响应最强。考察了壳聚糖和溶胶-凝胶对石墨烯/鲁米诺纳米复合物的固定化对传感器性能的影响,结果表明,壳聚糖能够更好地保持复合材料的化学发光活性,石墨烯/鲁米诺/壳聚糖膜传感器对H202的检测线性范围宽,在5.0×10-6-2.0×104 mol/L范围内呈良好的线性关系,检测限为2.7×10-6mol/L,且连续17次注射5.0×10-5mol/L H2O2的标准偏差为2.6%。本方法为生物化学发光传感器的制备开辟了新途径,具有良好的应用前景。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 绪论
  • 1.1 化学发光分析法
  • 1.1.1 化学发光分析法发展概述
  • 1.1.2 化学发光分析法的基本概念
  • 1.1.3 化学发光的基本原理
  • 1.1.4 化学发光分析的装置
  • 1.2 常见的化学发光反应体系及其在药物分析中的应用
  • 1.2.1 碱性化学发光体系
  • 1.2.2 酸性化学发光体系
  • 1.2.3 中性化学发光体系-过氧草酸酯类化学发光体系
  • 1.2.4 化学发光的应用和最新进展
  • 1.3 纳米材料在化学发光中的应用
  • 1.3.1 纳米材料概述
  • 1.3.2 纳米材料的制备
  • 1.3.3 纳米科技的研究现状
  • 1.3.4 纳米材料在化学发光反应中的应用
  • 1.4 本论文主要研究内容及意义
  • 参考文献
  • 第2章 流动注射化学发光法测定甲氧氯普胺的新方法研究
  • 2.1 引言
  • 2.2 实验部分
  • 2.2.1 仪器和试剂
  • 2.2.2 实验方法
  • 2.3 结果与讨论
  • 2.3.1 介质对化学发光强度的影响
  • 2.3.2 鲁米诺浓度的选择
  • 2O2浓度的选择'>2.3.3 H2O2浓度的选择
  • 2Cr2O7浓度的影响'>2.3.4 K2Cr2O7浓度的影响
  • 2.3.5 MCPM试液酸度的影响
  • 2.3.6 试液加热时间的影响
  • 2.3.7 干扰试验
  • 2.3.8 线性范围、精密度和检出限
  • 2.3.9 反应机理探讨
  • 2.3.10 甲氧氯普胺的含量测定及其回收实验
  • 2.4 结论
  • 参考文献
  • 第3章 基于Au NPs@C纳米复合材料和高效流路实现人体免疫球蛋白的超灵敏快速检测
  • 3.1 引言
  • 3.2 实验部分
  • 3.2.1 仪器和设备
  • 3.2.2 试剂
  • 3O4磁性纳米微球的制备'>3.2.3 Fe3O4磁性纳米微球的制备
  • 3O4/Ab1复合物的制备'>3.2.4 Fe3O4/Ab1复合物的制备
  • 3.2.5 Au NPs的制备
  • 3.2.6 碳纳米粒子(C NPs)的制备
  • 3.2.7 金包碳(Au NPs@C)纳米粒子的制备
  • 2-HRP/Au NPs@C的制备'>3.2.8 Ab2-HRP/Au NPs@C的制备
  • 3.2.9 免疫分析测定步骤
  • 3.3 结果与讨论
  • 3O4磁性微球的SEM表征'>3.3.1 Au NPs、C NPs、Au NPs@C和Fe3O4磁性微球的SEM表征
  • 3.3.2 紫外光谱表征
  • 3.3.3 流动注射化学发光检测体系的条件优化
  • 3.3.4 免疫分析过程的优化
  • 3.3.5 夹心式流动注射免疫分析测定HIgG
  • 3.4 结论
  • 参考文献
  • 第4章 GO/luminol复合材料的制备、表征及在化学发光传感器中的应用
  • 4.1 引言
  • 4.2 实验部分
  • 4.2.1 仪器与试剂
  • 4.2.2 氧化石墨烯(GO)制备
  • 4.2.3 石墨烯/luminol复合材料(GO/lumino1)制备
  • 4.2.4 传感器的构建
  • 4.2.5 化学发光分析
  • 4.3 结果与讨论
  • 4.3.1 GO/luminol不同制备方法对化学发光的影响
  • 4.3.2 GO/luminol不同制备方法对luminol固载量的影响
  • 4.3.3 红外光谱表征
  • 4.3.4 GO/luminol不同固定方法对传感器性能的影响
  • 4.3.5 化学发光分析反应条件的优化
  • 2O2的测定'>4.3.6 化学发光传感器用于H2O2的测定
  • 4.3.7 化学发光传感器稳定性考察
  • 4.4 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间的研究成果
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