论文摘要
白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1ra）为IL-1家族中的一员,其本身无任何激动剂的作用,但能特异性地与IL-1受体结合,从而拮抗IL-1的各种生物学效应。2001年,由Amgen公司生产的重组人白细胞介素1受体拮抗剂（rhIL-1ra,专利名称为Kineret）被美国食品与药物管理局（FDA）和欧洲EMEA批准上市,用于类风湿性关节炎的治疗,但是由于微量的IL-1就可以引起完全的生物学效应,在疾病治疗过程中只有IL-1ra与IL-1的比值达到10000-100000时才能有效地缓解症状,因此rhIL-1ra的用量高达100-150mg/d,频繁用药加重了病人的身体、心理和经济负担。 本研究旨在利用定点突变,延长IL-1ra的半衰期,提高其代谢稳定性。 本课题首先利用重叠延伸PCR对IL-1ra的基因进行以下几个位点的突变:R6K7-AA,R93K94-AA,K97R98-AA。将IL-1ra及三个突变体的序列插入表达载体pTIG-Trx,利用大肠杆菌BL21（DE3）对其进行表达,表达产物先后经镍柱亲和纯化,SephadexG75凝胶过滤获得纯度在90%以上的目的蛋白。利用EL-4,CTLL-2细胞对目的蛋白进行体外活性检测,结果表明,与IL-1ra相比,三个突变体的生物学活性并未降低。利用大耳白兔对野生型IL-1ra及三个突变体进行了初步的药代动力学分析,其中3号突变体的半衰期与野生型IL-1ra相比提高了2.26倍。 本课题为提高IL-1ra的代谢稳定性的研究奠定了初步的基础。
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