首页> 正文

猪肺炎支原体单克隆抗体的制备与初步鉴定

2020-11-22阅读(540)

猪肺炎支原体单克隆抗体的制备与初步鉴定

论文摘要

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp）是猪地方性肺炎（Swine EnzooticPneumonia,SEP）（亦称猪气喘病）的病原体。此病分布广,发病率高,自身致死率不高。由于Mhp能够破坏呼吸道黏膜-纤毛屏障,从而继发其他致病菌的感染,提高致死率。由于早期检测的困难和缺乏有效的药物,在疾病控制方面至今未能达到满意的效果。本实验以Mhp168株为材料,研制出其特异性单克隆抗体,并利用Mhp的全菌蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法,且证明有一定的实用性。 首先用KM2培养基（含马血清）培养Mhp168F323株。高速离心,用PBS悬浮沉淀。悬浮物反复冻融并超声波裂解后作为抗原,与等量完全弗氏佐剂（第一次）、不完全佐剂（第二次）混合后皮下及腹腔注射免疫8周龄BALB/c小鼠（200μg/只）,间隔时间3周。加强免疫3天后,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0细胞进行融合,并用间接ELISA方法进行筛选。初步鉴定为阳性的细胞克隆,采用有限稀释法进行3次亚克隆后,得到2株分泌特异性抗体的单克隆细胞株。生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价在1:104左右,免疫球蛋白亚类均为IgG3。免疫印记结果表明,单抗所针对的抗原表位分别在70KD和40KD左右,而且不与马血清蛋白反应,说明以上单抗是针对Mhp蛋白的单抗。用猪肺炎支原体Mhp168株培养物,制备抗原,建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法,试验的最佳反应条件为:抗原的包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1:100,酶标抗体为1:10000稀释;包被液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,2%的明胶作封闭液,洗涤液和稀释液均为含0.5%Tween-20的磷酸盐缓冲液;抗原抗体最佳结合时间为90min,酶标抗体最佳作用时间为60min.使用单抗阻断ELISA方法对血清样品进行了检测并与建立的间接ELISA方法进行了对比,发现单抗阻断ELISA方法对早期感染的猪气喘病病料具有较好的检出率。

论文目录

  • 摘要
  • 文献综述
  • 1、猪气喘病血清学
  • 2、猪肺炎支原体的黏附因子
  • 3、猪肺炎支原体主要免疫原蛋白
  • 4、抗支原体单克隆抗体的进展
  • 5、诊断方法现状
  • 前言
  • 试验一 猪肺炎支原体单克隆抗体的制备与初步鉴定
  • 1、材料与方法
  • 2、结果
  • 试验二 检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法与单抗阻断ELISA方法的对比试验
  • 1、材料与方法
  • 2、结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 附录

    • 相关论文文献

    • [1].猪气喘病损失评估[J]. 中国畜牧业 2019(21)
    • [2].中药参芪粉预防猪气喘病的效果观察[J]. 畜牧兽医科技信息 2019(12)
    • [3].浅谈猪气喘病的预防与治疗[J]. 新农业 2020(02)
    • [4].中药代替抗生素治疗猪气喘病效果观察分析[J]. 新农业 2020(03)
    • [5].猪气喘病的防治[J]. 当代畜禽养殖业 2020(01)
    • [6].中药代替抗生素治疗猪气喘病效果观察分析[J]. 新农业 2020(05)
    • [7].猪气喘病的防治[J]. 养殖与饲料 2020(03)
    • [8].猪气喘病的防治措施[J]. 中国畜禽种业 2020(02)
    • [9].猪气喘病的诊治及综合防控[J]. 饲料博览 2020(03)
    • [10].猪气喘病的治疗方法[J]. 猪业观察 2019(01)
    • [11].猪气喘病的诊治与净化措施[J]. 畜禽业 2020(06)
    • [12].防治母猪气喘病的几点措施[J]. 中国动物保健 2020(08)
    • [13].试论猪气喘病及防控措施[J]. 畜牧兽医科技信息 2020(07)
    • [14].猪气喘病的治疗与预防措施[J]. 中兽医学杂志 2018(09)
    • [15].猪气喘病的诊断与治疗[J]. 中国畜禽种业 2019(02)
    • [16].浅析猪气喘病引发原因和防治措施[J]. 中国畜禽种业 2019(02)
    • [17].规模猪场猪气喘病的防治[J]. 中国动物保健 2019(02)
    • [18].猪气喘病的流行特点及防控[J]. 吉林畜牧兽医 2019(02)
    • [19].猪气喘病的防治分析[J]. 湖北畜牧兽医 2019(03)
    • [20].冬季猪气喘病的预防与治疗措施探析[J]. 农家参谋 2019(09)
    • [21].猪气喘病的诊断和治疗[J]. 畜牧兽医科技信息 2019(04)
    • [22].猪气喘病预防与治疗[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2019(04)
    • [23].猪气喘病的诊断与防治措施[J]. 农民致富之友 2019(15)
    • [24].猪气喘病诊断和防治的研究[J]. 今日畜牧兽医 2019(05)
    • [25].猪气喘病的诊断与防治[J]. 畜牧兽医科技信息 2019(05)
    • [26].猪气喘病免疫与防治技术[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2019(06)
    • [27].猪气喘病的治疗与预防[J]. 畜禽业 2019(06)
    • [28].猪气喘病诊断与治疗[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2019(07)
    • [29].猪气喘病的治疗与预防[J]. 当代畜禽养殖业 2019(05)
    • [30].猪气喘病的诊断与防治措施探讨[J]. 吉林畜牧兽医 2019(07)

    标签：;  ;  ;  

    猪肺炎支原体单克隆抗体的制备与初步鉴定
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5