人腹膜间皮细胞水通道蛋白1，3和碱性成纤维生长因子对腹膜超滤影响的实验研究

论文摘要

背景和目的腹膜超滤衰竭（ultrafiltration failure，UFF）是长期腹膜透析（peritonealdialysis，PD）的主要并发症，成为PD患者被迫退出透析的主要原因之一。水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是一组介导跨细胞膜水转运的膜蛋白，新近研究发现腹膜间皮细胞有AQP1、AQP3表达，并与腹膜跨细胞水转运及病理情况下UFF的发生有着密切的联系。另外，对PD患者腹膜病理组织学检测发现腹膜血管形成增多，推测增多的新生血管可导致腹膜小分子溶质高转运，导致渗透压梯度消失，临床上即表现为UFF。已知血管形成受多种血管生成因子的调节，如血管内皮生长因子（vascular endothelial cell growth factor，VEGF）、碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ1）等。其中bFGF是一种具有促有丝分裂和新生血管形成的肽类因子，在组织纤维化的发展中起重要作用。近年来，学者发现PD患者透析流出液中可检测到bFGF mRNA的表达，提示间皮细胞可能具有分泌bFGF的潜力，并参与腹膜血管形成过程。非生理相容性透析液中的高浓度葡萄糖及葡萄糖降解产物（GDP）等是目前公认的致UFF的主要原因之一，此外慢性肾衰PD患者自身尿毒症环境也被认为是促发UFF的主要病因。而有关高糖和尿毒症内环境对腹膜间皮细胞AQPs的改变及其在腹膜超滤中的作用，目前研究很少，至于bFGF的研究仍是空白。本实验旨在观察AQP1、AQP3及bFGF在不同环境（高糖、高渗、尿毒症环境）下的表达变化，寻找它们在PD中表达的变化规律，并分析AQP1、AQP3和bFGF两者之间的相关性，以初步了解它们在UFF的发生中是否存在共同调控机制，为临床UFF的防治提供实验依据。方法体外培养人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells，HPMCs）。取生长状态良好细胞，待其融合成片时模拟体内PD环境，分别给予葡萄糖、尿毒症血清刺激，将细胞分为正常组、高糖组、尿毒症组、高糖+尿毒症联合刺激组，同时设立甘露醇组以判断高渗环境对细胞AQP1、AQP3及bFGF表达的影响。采用细胞免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（reverse transcript polymerse chainreaction，RT-PCR）方法测定不同因素刺激下HPMCs AQP1、AQP3、bFGF蛋白质和mRNA表达水平的变化，并进行比较和相关性分析。结果1．正常HPMCs可测得AQP1、AQP3和bFGF蛋白质、mRNA水平的表达。2．与正常组相比，高糖组、甘露醇组AQP1、AQP3蛋白质表达增强，强阳性表达主要出现在尿毒症组和高糖+尿毒症组。AQP1、AQP3 mRNA表达半定量分析显示：与正常组相比，高糖组、尿毒症组、高糖+尿毒症组AQP1、AQP3mRNA表达增高，组间比较有统计学意义（P＜0.05）。其中高糖组和甘露醇组细胞AQP1 mRNA（P=0.15）、AQP3 mRNA（P=0.45）表达差异无统计学意义。3．与正常组相比，高糖组、尿毒症组及高糖+尿毒症组bFGF蛋白质表达增强，而甘露醇组bFGF蛋白质表达与正常组相似。bFGF mRNA表达半定量分析显示：与正常组相比，高糖组、尿毒症组、高糖+尿毒症组bFGF mRNA表达增高（P＜0.001），而甘露醇组mRNA表达虽增多，但差异无统计学意义（P=0.32）；4．高糖组（r=0.887，P=0.045）、尿毒症组（r=0.910，P=0.032）及高糖+尿毒症组（r=0.899，P=0.038）AQP1与bFGF的mRNA表达呈现正相关趋势，AQP3与bFGF的mRNA表达无相关性（P＞0.05）。小结1．高糖、尿毒症血清可上调HPMCs AQP1和AQP3的表达，影响腹膜超滤；2．高糖诱导AQP1、AQP3的表达是通过其提高渗透压的作用实现的；3．高糖、尿毒症血清可使HPMCs bFGF表达上调，推测可引起腹膜血管增多，进而导致UFF的发生；

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分
• 前言
• 材料方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 附录一 综述
• 附录二 中英文名词对照
• 致谢