苏皖地区禽白血病流行病学调查及其净化初步研究

论文摘要

禽白血病是由禽白血病病毒引起的禽类各种可传播的肿瘤性疾病。有关禽白血病危害的研究报道可追溯到19世纪末期,但由于当时ALV对养禽业的影响较小,在相当长的一段时间内并没有受到人们的足够重视。20世纪90年代以后,由禽白血病病毒引起肉种鸡严重的成髓细胞性白血病,给养鸡业造成了巨大的损失。近年来由禽白血病造成的鸡群死亡和淘汰的直接经济损失正逐年增加,而由禽白血病病毒感染造成的免疫抑制、对疫苗应答能力的下降、继发感染等间接经济损失更是无法估量。本研究从病原学和血清学等方面开展ALV的流行病学调查,为苏皖地区ALV的防控提供理论依据。在流行病学调查的基础上对感染情况较为严重的两个地方品系种鸡场开展了ALV净化的初步研究。1、苏皖地区禽白血病流行病学调查为了解苏皖地区ALV感染状态,利用IDEXX公司ALV p27抗原检测试剂盒、A/B亚群抗体检测试剂盒、J亚群抗体检测试剂盒对苏皖地区12个规模化鸡场,共10个种鸡群的7000余只外表正常种鸡的泄殖腔棉拭及血液样本开展了禽白血病抗原及血清学抗体的ELISA检测。品种包括海兰、罗曼及部分地方品系父母代种鸡。结果显示受调查的鸡群,有66.7%（8/12）的鸡群存在AB抗体阳性个体,个体阳性检出率为6.4%；有83.3%（10/12）的鸡群存在J抗体阳性个体,个体阳性检出率为5.6%；100%（12/12）的鸡群存在p27抗原阳性个体,个体阳性率达21.2%。表明不同亚型ALV感染在苏皖两地己非常普遍,有62.5%（5/8）的鸡群还出现了A/B抗体和J抗体混合感染的个体。对同一个鸡群的追踪检测显示,在鸡只成长过程中ALV阳性检出率在6W和22W会出现两个相对高峰,为后期鸡群净化工作提供了相关参考依据。2、临床血管瘤表型鸡群禽白血病的病原学检测本研究对临床血管瘤为主要表型病例的海兰蛋鸡在组织剖检观察的基础上,经ELISA抗原抗体检测、聚合酶链式反应（PCR）、病毒分离、以及亚群特异性免疫荧光试验（IFA）,从送检海兰蛋鸡中分离并鉴定出1株J亚群禽白血病病毒,命名为ALV-J JS09GY07。利用特异性抗J亚群禽白血病病毒（ALV-J）囊膜糖蛋白gp85的单克隆抗体通过免疫组化法进行检测,结果在送检鸡只的肾脏和肺脏的组织切片中检测到阳性抗原。通过分子生物学技术对ALV-J病毒基因组进行克隆测序,按照已发表的ALV-J HPRS-103毒株前病毒全基因组序列进行拼接,获得了ALV-J JS09GY07株的前病毒全基因组序列。JSO9GY07株基因组序列测定结果表明,该毒株cDNA基因组全长为7659个核苷酸,Non-functional TM序列与HPRS-103原形株相比,分离株存在205个碱基的缺失。分离株与国际参考株HPRS103和ADOL-7501的同源性分别为95.2%和94.3%：与4株白羽肉鸡的参考毒株（NXO101、YZ9902、JS-nt、 NM2002-1）的同源性在94.6%～95.0%之间,与4株商品蛋鸡参考毒株（SD07LK1、 NHH、 JS09GY3、 JS09GY6）的同源性在94.7%～99.4%之间。3、规模化鸡场ALV净化的初步研究鉴于禽白血病在中国感染的复杂状况,本研究在ALV净化金标准方案的基础上结合本室自行研发的p27抗体ELISA检测试剂盒,对代号为DYAH91和DYJS31的地方品系鸡群开展了净化研究。分别在第一世代留种前期、第二世代1日龄雏鸡、第二世代6W和22W鸡的p27抗原（泄殖腔排毒）、p27抗体、A/B亚群抗体、J亚群抗体及病毒分离等进行ALV检测,淘汰阳性鸡只,阴性鸡只隔离饲养,防止水平传播。经过一个世代的净化更替,ALV阳性率显著下降,DYAH91鸡群p27抗原阳性率由14.4%下降到8.1%,p27抗体阳性率由3.4%下降到1.0%,A/B亚群抗体阳性率由5.7%下降到2.2%,病毒分离阳性率第一代的3.1%下降到0.45%；DYJS31鸡群,p27抗原阳性率由40.7%下降到2.8%,p27抗体阳性率由的18.7%下降到3.3%,A/B亚群抗体阳性率由的10.2%下降到1.4%,J亚群抗体由1.7%下降到1.4%,病毒分离阳性率由4.1%下降到0%。结果表明该净化程序效果明显,适于进一步推广应用。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• Abstract
• 综述：禽白血病病毒研究进展
• 1 病原学
• 2 流行病学
• 3 临诊症状及病理变化
• 4 诊断
• 5 近年我国部分地区禽白血病的流行现状
• 6 禽白血病病毒的感染与控制
• 研究内容一 苏皖地区禽白血病流行病学调查
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 研究内容二 临床血管瘤表型鸡群禽白血病的病原学检测
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 研究内容三 规模化鸡场ALV净化的初步研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文