葛根素对于体外培养成骨细胞OPG/RANKL基因系统表达的影响

论文摘要

葛根素是从中药葛根中提取出的一种化学物质,临床研究发现,葛根素具有治疗骨质疏松症的作用。实验表明,葛根素治疗骨质疏松症的其中之一机理,为其促进成骨细胞的增殖和分化作用相关,但是其具体的分子机制尚不明确,需要通过进一步研究来进行探讨。目的：通过实验来探讨葛根素治疗骨质疏松症的分子机制。研究方法：取新生24小时的SD大鼠头盖骨,使用0.1%Ⅱ型胶原酶消化法分离出成骨细胞,取第四代成骨细胞进行实验,使用碱性磷酸酶染色法以及形态学法鉴定成骨细胞,碱性磷酸酶比色法检测葛根素对促成骨细胞分化能力的影响,通过MTT法检测不同浓度、不同时间葛根素药液对成骨细胞增殖能力的影响,按照MTT法检测的最佳葛根素药物浓度和作用时间,作用成骨细胞,Realtime PCR法检测其OPG/RANKL基因转录,Western Blot法,检测其OPG/RANKL蛋白量的表达,最后通过统计学分析OPG/RANKL表达量的比值变化。结果：①通过碱性磷酸酶染色法,可见培养细胞胞浆内有许多细小棕色颗粒的存在鉴定为成骨细胞；②MTT结果显示,葛根素药物浓度为1mg/ml,0. lmg/ml和0.01mg/ml时,作用成骨细胞时间为24小时后,对照相同浓度12小时和48小时处理组,MTT值显示最明显（1mg/ml:53.28±0.42,0.1mg/ml:66.13±0.55,0.01mg/ml:54.81±0.74）,与对照组比较具有统计学差异（P<0.05）；③碱性磷酸酶比色法结果证实,葛根素处理液浓度lmg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml作用成骨细胞24小时后,相比较相同浓度12小时和48小时组,碱性磷酸酶表达效果最好（1mg/ml:0.521±0.08,0.1mg/ml:0.612±0.03,0.01mg/ml:0.706±0.06）,与对照组比较具有统计学差异（P<0.05）；④RealtimePCR法检测了成骨细胞OPG/RANKL的基因转录水平,1mg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml三个葛根素处理组,作用成骨细胞24小时后,OPG/RANKL基因转录比值为,1mg/ml:0.582+0.02,0.1mg/ml:0.823±0.03,0.01mg/ml:0.801±0.06,与对照组比较具有统计学意义（P<0.05）；⑤Western Blot法检测了成骨细胞内OPG/RANKL蛋白表达水平,1mg/ml,0.1mg/ml和0.01mg/ml三个葛根素处理组,作用成骨细胞24小时后,OPG/RANKL的比值为,1mg/ml:0.77±0.24,0.1mg/ml:0.79±0.32,0.01mg/ml:0.76±0.85,与对照组的比较均具有统计学意义（P<0.05）。结论：葛根素可以通过影响OPG/RANKL基因的表达,进而促进成骨细胞的增殖和分化。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 序言
• 第一章 文献综述
• 1 葛根素治疗骨质疏松症的研究
• 1.1 成分
• 1.2 促进成骨细胞的增殖分化
• 1.3 抑制破骨细胞的增殖分化
• 1.4 调节雌激素受体水平
• 1.5 调节骨质疏松症的相关细胞因子
• 1.6 促进OPG基因的转录
• 2 葛根素的一般药理活性研究
• 2.1 葛根素对免疫功能的调节作用
• 2.2 葛根素对血液系统的调节作用
• 2.3 葛根素对神经系统的调节作用
• 2.4 葛根素的抗氧化作用
• 2.5 葛根素对抗酒精中枢抑制作用
• 3 成骨细胞内OPG/RANKL信号通路的研究进展
• 3.1 OPG
• 3.2 RANKL
• 3.3 RANK
• 3.4 OPG/RANKL系统的调节作用
• 第二章 实验研究
• 实验一 成骨细胞的原代分离与培养
• 实验二 碱性磷酸酶染色试法鉴定成骨细胞
• 实验三 MTT法检测不同浓度葛根素对于体外培养成骨细胞增殖能力影响
• 实验四 碱性磷酸酶活性检测不同浓度葛根素对于体外培养成骨细胞分化能力影响
• 实验五：Realtime PCR法检测不同浓度葛根素对干体外培养成骨细胞OPG/RANKL基因表达的影响
• 实验六：Western blot法检测不同浓度葛根素对于体外培养成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响
• 结语
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果
• 致谢