细菌鞭毛蛋白在IBD发病中的作用机制研究

论文摘要

研究背景炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）的发病率成逐年上升趋势,确切病理机制不明。可能受到肠道菌群、免疫介导的组织损伤和遗传易感性等多种因素的综合影响。许多研究显示,细菌是IBD的促发因素。鞭毛蛋白（CBir1）作为鞭毛细菌抗原的重要成分,也是细菌的毒性成分,现有关细菌鞭毛蛋白与IBD关系的研究较少。目的通过建立IBD动物模型,观察小鼠疾病活动情况,检测其血清及组织中CBir1、TLR5和肥大细胞类胰蛋白酶(β2（Mast cell tryptase, MCT）、组胺的表达水平,并对模型组进行干预,研究CBirl在IBD致病中的作用,了解它对IBD诊断和炎症活动程度评估的重要意义,以探讨IBD发病机制。方法SPF级雄性BALb/c小鼠随机分为6组,每组12只。①正常对照组：野生型BALb/c小鼠,自由饮食。②生理盐水组：禁食24h,自由饮水,100μl生理盐水灌肠后自由饮食,于第8天,第15天重复此操作。③50%乙醇组：将50%乙醇溶液100μl灌肠。④TNBS+50%乙醇组：第1天用2.0mgTNBS/50%乙醇100μl灌肠,第8天用2.5mgTNBS/50%乙醇100μl灌肠,第15天用3.0mgTNBS/50%乙醇100μl灌肠。⑤酮替芬+TNBS+50%乙醇组：将0.5mg酮替芬溶于生理盐水100μl,于灌肠前30min每只小鼠腹腔注射100μl;酮替芬溶液⑥LPS+OVA+TNBS+50%乙醇组：将LPS10μg+OVA20μg溶于生理盐水100μl于第7、9、12、15天对每只小鼠腹腔注射100μl此溶液,OVA50μg溶于生理盐水100μl于第18、19、20、21天进行腹腔注射100μl此溶液。对各组小鼠进行DAI评分,于第22天全部剪头处死,ELISA检测血清中抗-CBir1、MCT、组胺浓度,结肠组织HE染色后进行HI评分,免疫组化方法检测结肠组织内CBir1、TLR5和MCT的表达。实验数据用SPSS13.0统计软件处理,计量数据采用均数±标准差（x±s）农示,所有数据用Levene检验方法进行方差齐性检验,各组数据采用单因素方差分析（ANOVA）,对方差分析有意义者再采用LSD-t检验法进行两两比较,检验水准为α=0.05,P<0.05时被认为具有统计学意义。采用Pearson积矩相关系数来描述变量之间的关系。结果（1）正常对照组、生理盐水组的结肠粘膜上皮完整,腺体排列规则,几乎无炎症细胞浸润。50%乙醇组粘膜层分布少量淋巴细胞。TNBS+50%乙醇组上皮细胞破碎,杯状细胞减少,粘膜层、肌层内大量炎症细胞浸润,粘膜上皮见小片状坏死,并于粘膜下层及固有肌层小血管增生。酮替芬+TNBS+50%乙醇组粘膜层、肌层有少量的淋巴细胞浸润。LPS+OVA+TNBS+50%乙醇组正常腺体结构消失,炎症累及肠壁全层,固有基层增厚。且肠粘膜组织学损伤程度越深,CBirl（或抗-CBir1）、MCT、（或）TLR5和（或）组胺在肠粘膜组织中和（或）血清中的表达越高。（2） TNBS+50%乙醇组、酮替芬+TNBS+50%乙醇组、LPS+OVA+TNBS+50%乙醇组的DAI评分、HI评分、CBirl（或抗-CBirl）、MCT、（或）TLR5和（或）组胺在肠粘腆组织中和（或）血清中的表达明显高于正常对照组（P<0.05）,差异有统计学意义；酮替芬+TNBS+50%乙醇组低于TNBS+50%乙醇组（P<0.05）,差异有统计学意义；TNBS+50%乙醇组低于LPS+OVA+TNBS+50%乙醇组（P<0.05）,差异有统计学意义；生理盐水组、50%乙醇组与正常对照组比较（P>0.05）差异无统计学意义。（3）IBD模型组血清抗（?）-CBirl与MCT浓度呈正相关（r1=0.648,P1<0.01）,血清抗-CBir1与组胺浓度亦呈正相关（r2=0.751,P2<0.01）。结论（1） CBir1参与了实验性IBD的致病过程；（2） CBir1可通过激活肥大细胞,被激活的肥大细胞释放化学介质从而导致肠道炎症反应的发生；（3） CBirl、TLR5、MCT和组胺的表达量与IBD模型结肠炎的严重程度一致。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 縮略词表
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 细菌鞭毛蛋白与IBD的研究进展
• 参考文献
• 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢