论文题目: 重组人胰岛素原C肽对糖尿病视网膜病变的早期干预作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 眼科学
作者: 王玲
导师: 王文吉,莫晓芬,徐格致,江睿
关键词: 糖尿病视网膜病变,动物模型,大鼠视网膜细胞,牛视网膜微血管内皮细胞,胰岛素,胰岛素原肽,血管内皮生长因子,一氧化氮,血视网膜屏障
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的：观察胰岛素原C肽对体外培养的视网膜Müller细胞和微血管内皮细胞的影响，及其与胰岛素的相互作用。并通过在体研究，观察早期单独应用生理剂量的重组人胰岛素原C肽对实验性糖尿病大鼠视网膜表达血管内皮生长因子（VEGF）及一氧化氮合酶（NOS）活力和一氧化氮合成（NO）的影响，及其对血-视网膜屏障功能的影响，探讨其作为预防糖尿病视网膜病变药物的前景。方法：（1）酶消化法分离培养大鼠视网膜Müller细胞及牛视网膜微血管内皮细胞。免疫细胞化学法及透射电镜鉴定细胞性质。培养细胞各组分别添加不同浓度的胰岛素原C肽或／和胰岛素。硝酸还原酶法测定上清NO含量。ELISA法测定上清VEGF含量。（2）链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。实验动物分三组，糖尿病组、糖尿病应用C肽组（C肽剂量：130nmol／KgBW皮下注射2次／日）、正常对照组，SPF环境饲养八周，每周测定体重及血糖。免疫组织化学法对眼球切片作视网膜VEGF表达的定性检测，ELISA法对视网膜匀浆作VEGF含量的定量检测。分型测定视网膜NOS活力。硝酸还原酶法测定视网膜匀浆NO含量。伊凡斯蓝示踪法测定血-视网膜屏障功能。结果：（一）离体试验：（1）C肽抑制Müller细胞NO合成：胰岛素组平均NO浓度明显高于正常对照组（t=4.111，P＜0.01，n=6）。C肽组低于正常组（t=2.932，P＜0.05）。联合应用组与对照组无差异（t=1.891，P＞0.1）。C肽作用与浓度有关。（2）单独应用胰岛素原C肽对Müller细胞表达VEGF无影响（F=0.58，P＞0.05），但等摩尔浓度(10-5mol／L)的C肽联合胰岛素应用时，可以抑制胰岛素引起的VEGF表达增高，两者之间的交互作用有显著意义（F=7.50，P＜0.05）。（3）10-5胰岛素使BREC合成NO增加（t=4.922，P＜0.001）；10-5mol／L的胰岛素原C肽与胰岛素联合应用使BREC合成NO水平降低至胰岛素组与正常组之间(vs 10-5M胰岛素组：t=2.318，P＜0.05；vs对照组：t=2.806，P＜0.02)；浓度10-9-10-5M的胰岛素原C肽可以抑制BREC合成NO，各浓度间无差异（P＞0.05）。（二）在体试验：（1）糖尿病组与糖尿病应用C肽组大鼠血糖维持在24.14-33.3mol／L的高水平，体重不随周龄增长，正常对照组大鼠血糖波动于正常范围，体重稳步增长。（2）三组视网膜均有VEGF阳性表达，阳性颗粒主要位于神经节细胞层与近内核层，其中糖尿病组视网膜内核层阳性颗粒密集，其他两组较少。三组视网膜VEGF含量分别为，正常对照组4.30±1.012，糖尿病组10.63±2.743，糖尿病C肽组7.49±2.262。三组间差别有统计意义（F=13.604，P＜0.01）。（3）视网膜匀浆的平均NO含量分别为：糖尿病组0.115±0.023，糖尿病用C肽组0.079±0.013，正常对照组0.042±0.017（μmol／gprot）。三组间差别有极显著意义（F=16.63，P＜0.01）。糖尿病组平均iNOS 2.662±0.355，cNOS 2.556±0.260，糖尿病用C肽组平均iNOS2.238±0.367，cNOS3.286±0.383，正常对照组平均iNOS 1.997±0.292，cNOS4.063±0.636（U／mgprot），三组间差别均有统计意义（iNOS：F=6.877，P＜0.01；cNOS：F=9.892，P＜0.01）。（4）三组视网膜EB渗漏分别为，糖尿病组186.74±16.00，糖尿病用C肽组141.47±33.48，正常对照组32.02±11.45，三组间差异有极显著的统计意义（F=47.17，P＜0.01）。结论：（1）联合应用等摩尔胰岛素原C肽与胰岛素可以纠正胰岛素引起的视网膜Müller细胞NO合成过度。（2）联合应用等摩尔胰岛素原C肽与胰岛素可以纠正胰岛素引起的Müller细胞VEGF表达过度。（3）胰岛素原C肽可以纠正胰岛素引起的牛视网膜微血管内皮细胞合成NO过度。（4）早期单独应用胰岛素原C肽可以部分改善糖尿病引起的视网膜VEGF高表达，调节视网膜NOS活力，部分抑制视网膜NO过度合成，并部分恢复血-视网膜屏障功能、减少白蛋白渗出。
论文目录:
中文摘要
Abstract
前言
(一)多元醇代谢通路激活
(二)蛋白质的非酶糖基化:
(三)自由基的作用:
(四)二酞基甘油-蛋白激酶C(DG-PKC)系统的活化:
(五)细胞因子的作用:
第一部分 C肽对培养的大鼠Müller细胞合成VEGF与NO的影响
第一节 大鼠视网膜Müller细胞培养
第二节 C肽对Müller细胞NO合成的影响
第三节 C肽对Müller细胞表达VEGF的影响
第二部分 C肽对培养的牛视网膜微血管内皮细胞合成NO的影响
第一节 牛视网膜微血管内皮细胞培养
第二节 C肽对BREC合成NO的影响
第三部分 胰岛素原C肽对STZ诱导的实验性糖尿病大鼠的影响
第一节 C肽对糖尿病大鼠视网膜表达VEGF的影响
第二节 C肽对糖尿病大鼠视网膜NOS活力及NO合成的影响
第三节 C肽对糖尿病大鼠血视网膜屏障的影响
参考文献
综述
相关论文
致谢
发布时间: 2007-06-27
参考文献
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